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TSZelisa试剂盒组成结构
1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤:
1.加规范品:在酶标包被板上设规范品孔,顺次参加不一样浓度的规范品50ul(主张每个浓度做2个平行孔)
2.加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其他各步操作一样)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗刷:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:除空白孔外每孔参加酶标试剂50μl。
7.温育:操作同3。
8.洗刷:操作同5。
9.显色:每孔先参加显色剂A50μl,再参加显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色15分钟.
10.停止:每孔加停止液50μl,停止反响(此刻蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加停止液后15分钟以内进行。
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- 2005-01-27 09:23:09
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