ELISA试剂盒实验中出现假阳性的操作解析

在现如今，应用越来越广泛的ELISA试剂盒操作实验中，ELISA实验的操作方法大同小异，迄今为止，反馈的许多的老师实验中，发现ELISA实验中出现假阳性的问题，逐渐增多。我公司实验技术人员，就以上问题，给各位整理一下几点，供各老师参考：

ELISA试剂盒造成假阳性主要有以下几点：

一.错误的操作手法

1、加样

对于间接的ELISA标本一般都是需要进行稀释，如果加样不准确就会造成误差，尤其当稀释倍数大时，很小的误差，就会导致较大的相对误差，使阴性（或弱阳性）标本呈阳性（或阴性）。加样时应当将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可产生气泡，不可溅出。现如今，科学发展的进步，大部分血站及样本都已使用全自动酶免加样系统处理标本，可较好地避免以上误差。

2、洗涤

ELISA实验中正确的洗涤是保证得到，可重复结果的关健一步，应引起操作者重视。无论是手工操作还是机器操作，得出不正确的结果往往与不正确的洗涤有关，ELISA就是靠洗涤来达到分离，游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗体或抗原结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。

3、温育

每种试剂都有其Z合适的反应模式，其中温度和温育时间控制是一个重要因素。因孵育温度高，反应时间长，会造成整板本底高，阳性率高。温育一般用湿盒或水浴，反应板不宜叠放，以保证各板温度都能迅速平衡，为避免蒸发，板上应加盖。

4、酶标仪判读

作为记录测定结果的仪器，酶标仪的性能稳定与否，决定结果的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正；其次酶标仪波长设置要正确，Z好使用双波长，一个检测波长，一个参比波长，以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的光干扰。此外，在用酶标仪读数时Z好先擦试微孔板底部并压平板条。由于各种酶标仪性能有所不同，使用中应详细阅读说明书，以便操作者使用。

综上所述，在ELISA实验中造成假阳性的错误操作应该尽Zda可能去避免和消除。由于酶联免疫吸附技术目前在技术上缺乏标准化，尽管目前国际上以及我国有了部分标准血清或参比血清（血清盘）。但由于受方法学及技术条件的限制，在酶联吸附测定中有时不可避免的会出现一定的非特异性，但我们可以通过以上措施把非特异性显色降至Zdi限底，从而提高检测的特异性，并得到更准确、可靠的实验结果。

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