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- 【导读】 在生物学迅速发展的今天, 凝胶电泳作为主要的科研实验手段早已被广泛应用于核酸和 蛋白的分离, 而电泳图像的获取和相关分析主要依靠凝胶成像系统。 凝胶成像即对 DNA/RNA/
在生物学迅速发展的今天, 凝胶电泳作为主要的科研实验手段早已被广泛应用于核酸和 蛋白的分离, 而电泳图像的获取和相关分析主要依靠凝胶成像系统。 凝胶成像即对 DNA/RNA/ 蛋白质等凝胶电泳不同染色(如 EB、考马氏亮蓝、银染、Sybr Green)及微孔板、平皿等非 化学发光成像检测分析。凝胶成像系统可以应用于分子量计算,密度扫描,密度定量, PCR 定量等生物工程常规研究。 凝胶成像应用范围 总体上来说凝胶成像可应用于: 凝胶成像系统可以用于: 蛋白质、 核酸、 多肽、 氨基酸、 多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析。
(1)分子量定量 对于一般常用的 DNA 胶片,利用分子量定量功能,通过对胶上 DNA Marker 条带的已知分 子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量。通过这种方法所得到的结 果较肉眼观察估计要准确很多。
(2)密度定量 一般常用的测定 DNA(脱氧核糖核酸)和 RNA(核糖核酸)浓度的方法是紫外吸收法,但它只 能测定样品中的总核苷酸浓度,而不能区分各个长度片段的浓度。利用凝胶成像系统和软件, 先将 DNA 胶片上某一已知其 DNA 含量的标准条带进行密度标定以后,可以方便的单击其他未 知条带,根据与已知条带的密度做比较,可以得到未知 DNA 的含量。此方法也适用于对 PA GE 蛋白胶条带的浓度测定。
(3)密度扫描 在分子生物学和生物工程研究中,*常用到的是对蛋白表达产物占整个菌体蛋白的百分 含量的计算。传统的方法是利用专用的密度扫描,但利用生物分析软件结合现在实验室常规 配备的扫描仪或者直接用白光照射的凝胶成像就能完成此项工作。
(4)PCR 定量 PCR 定量主要是指,如果 PCR 实验扩增出来的条带不是一条,那么可以利用软件计算出 各个条带占总体条带的相对百分数。就此功能而言,与密度扫描类似,但实际在原理上并不 相同。PCR 定量是对选定的几条带进行相对密度定量并计算其占总和的百分数,密度扫描时 并对选择区域生成纵向扫描曲线图并积分。
凝胶成像种类 (1)普通凝胶成像分析系统'>凝胶成像分析系统:可以对蛋白电泳凝胶,DNA 凝胶样品进行图象采集并进 行定性和定量分析, 样品包括: SYBR Green、 EB、 SYBR Gold、 Texas Red、 GelStar、 Fluoroscecin、 Radiant Red 等染色的核酸监测;以及 Coomassie Blue、SYPRO Orange、各种染色的蛋白质凝 胶如考染等。 (或 UV,EB 和有色及可见样品成像) ; (2)化学发光成像分析系统:成像范围涵盖 UV,EB,化学发光、紫外-荧光、有色及可见 样品成像; (3)多色荧光成像分析系统:成像范围涵盖 UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像; (4)多功能活体成像分析系统:UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成 像和离体组织和小型动物,及大型型动物。
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