GX液相色谱仪在原料乳与乳制品三聚氰胺检测中的应用

　　1 前言

　　依据GB/T 22388—2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法，本文提供了LC98-II型GX液相色谱仪(HPLC)对原料乳及乳制品中三聚氰胺的GX液相色谱(HPLC)检测方法。

　　2 范围

　　GB/T 22388—2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法中，提出GX液相色谱法的定量限为2 mg/kg，液相色谱-质谱/质谱法的定量限为0.01 mg/kg。而本文所提供的LC98-II型GX液相色谱仪(HPLC)对原料乳与乳制品中三聚氰胺的定量检测限可达0.05mg/kg。

　　3 GX液相色谱法

　　3.1 原理

　　试样用三***溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用GX液相色谱测定，外标法定量。

　　3.2 试剂与材料

　　均按GB/T 22388—2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法的3.2操作。

　　3.3 仪器和设备

　　3.3.1 LC98-II型GX液相色谱仪(北京温分分析仪器技术开发有限公司)：配有P98-II型高压输液泵及UV98-II型紫外检测器。

　　3.3.2 分析天平：感量为0.0001 g和0.01 g。

　　3.3.3 离心机：转速不低于4000 r/min。

　　3.3.4 超声波水浴。

　　3.3.5 固相萃取装置。

　　3.3.6 氮气吹干仪。

　　3.3.7 涡旋混合器。

　　3.3.8 具塞塑料离心管：50 mL。

　　3.3.9 研钵。

　　3.4 样品处理

　　均按GB/T 22388—2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法的3.4操作。

　　3.5 GX液相色谱测定

　　3.5.1 HPLC 参考条件

　　a) 色谱柱：C8柱，250 mm×4.6 mm，5 μm，或C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm。

　　b) 流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液(3.2.10)-乙腈(85+15，体积比)，混匀。C18柱，离子对试剂缓冲液(3.2.10)-乙腈(90+10，体积比)，混匀。

　　c) 流速：1.0 mL/min。

　　d) 柱温：40℃。

　　e) 波长：240 nm。

　　f) 进样量：20 μL。

　　3.5.2 标准曲线的绘制

　　用流动相将三聚氰胺(CAS N108781)标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.1、0.8、2、20、40、80 μg/mL 的标准工作液， 浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到图A所示标准曲线。

　　图A 标准曲线

　　3.5.3 定量测定

　　待测样(旺旺集团提供)液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。下图所示浓度为0.1mg/kg三聚氰胺待测样色谱图及数据。

　　3.5.4 结果计算

　　试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式(1)计算获得：

　　A × c × V×1000

　　X= × f ……………………(1)

　　As × m×1000

　　式中：

　　X—— 试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　A—— 样液中三聚氰胺的峰面积;

　　c—— 标准溶液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);

　　V—— 样液*终定容体积，单位为毫升(mL);

　　As —— 标准溶液中三聚氰胺的峰面积;

　　m—— 试样的质量，单位为克(g);

　　f—— 稀释倍数。

　　3.6 空白实验

　　除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。

　　3.7 仪器定量检测限

　　LC98-II型GX液相色谱仪(HPLC)的噪声指标为5X10-U/mV(50μV)，按式(1)计算，可得LC98-II型GX液相色谱仪(HPLC)对原料乳与乳制品中三聚氰胺的定量检测限可达0.05mg/kg。

　　3.8 回收率

　　在添加浓度2 mg/kg～10 mg/kg浓度范围内，回收率在80%～110%之间，相对标准偏差小于10%。

　　3.9 允许差

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的**差值不得超过算术平均值的10%。

　　3.10 结论

　　本文所提供的LC98-II型GX液相色谱仪(HPLC)对原料乳与乳制品中三聚氰胺的定量检测限可达0.05mg/kg。远远优于GB/T 22388—2008规定的2mg/kg定量检测限，为GB/T 22388—2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法中规定的定量限的1/40。