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- 【导读】 elisa试剂盒知识介绍
elisa试剂盒知识介绍 elisa试剂盒知识介绍
ELISA质量保证是一个复杂的过程,许多重要的环节都影响到检测的质量:
一、操作因素对ELISA结果的影响
ELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。
1.加样
2.温育
3.洗涤
4.显色
5.比色
二、灰区的设置
通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value,CO值),这是定性免疫测定结果报告的依据。
三、标本复查
ELISA手工检测过程复杂,影响因素较多,即使室内质控在控,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法,比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。如何做到准确-精密性 如何做到准确 精密性
影响精密性的因素: 1、研发过程: 活性材料 载体 反应 体系
如何做到准确-精密性 如何做到准确 精密性
影响精密性的因素: 1、生产过程: a、液体组分:保证均质性;
载体
b、固相:
原辅材料 生产过程-准备阶段、生产过程、干燥阶段
如何做到准确-正确(特异性、干扰) 如何做到准确 正确(特异性、干扰) 正确
正确:保证测定物质是待测物而非其他物质。
任何分析方法,定量或定性, 任何分析方法,定量或定性,都会受干扰
待测物 样本 干扰物 干扰反应 交叉反应(特异性)
如何做到准确-正确(特异性、干扰) 如何做到准确 正确(特异性、干扰) 正确
非特异***叉反应,干扰物的结构相似于抗原, 能和抗体反应。
如何做到准确-正确(特异性、干扰) 如何做到准确 正确(特异性、干扰) 正确
干扰:广义上的定义为某物质对分析物的浓度测 定中任何步骤的影响称为分析干扰。 内源性干扰 干扰来源: 外源性干扰
如何做到准确-正确(特异性、干扰) 如何做到准确 正确(特异性、干扰) 正确
干扰机制: 基质效应:干扰物可能改变了标本基质的物理 性质,如粘度、表面张力、浊度或离子强度,使 检测的分析物发生变化。 如溶血(血红蛋白影响)、黄疸(胆红素)、脂 血(甘油三脂) 新旧血清差别(其物理化学性质与新鲜样品差异) 样本准备时外加的物质(抗凝剂、防腐剂等)
如何做到准确-正确(特异性、干扰) 如何做到准确 正确(特异性、干扰) 正确
干扰机制: 非特异性:干扰物会和分析物以基本类似的方 式参与反应,造成结果的偏差。 1、分析类似物干扰: 2、类风湿因子的干扰:自身免疫性抗体,可与 变性或凝集IgG Fc片段起反应; 3、嗜异性抗体干扰:通过交联固相和酶标抗体 形成假阳性反应; 4、自身抗体的干扰:anti-Tg,T3、T4自身抗体 等
如何做到准确-正确(特异性、干扰) 如何做到准确 正确(特异性、干扰) 正确
降低干扰对检测准确性的影响: 1、对试剂盒的干扰因素有充分的评价,确定干扰来 源,对于能够通过技术手段消除的予以消除或降低。 2、风险提示
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- 2006-07-29 13:51:03
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