细胞培养常见问题及解答（三）

细胞培养常见问题及解答（三）

18. 昆虫细胞培养的*适PH值和渗透压是多少？
    生长培养基的PH值对细胞的增值和病毒或重组蛋白的生产均会产生影响。对于大部分鳞翅类昆虫细胞系，在PH值 6.0－6.4范围的大部分应用效果良好。培养鳞翅类昆虫细胞系时，培养基的*适渗透压是 345－380mOsm/kg.。为保证可靠和持久的细胞培养方式，减少技术问题，保持PH值和渗透压在以上所列的范围之内。

19. High Five细胞有任何其它名称吗？
    High Five细胞也被称为Trichoplasia ni 5B1-4和BTI-TN-5B1-4。

20.在High Five无血清培养基中去污剂的浓度是多少？
    High Five无血清培养基中去污剂的浓度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。

21.High Five细胞用多大的密度冻存？
    3.0x10E6 cells/ml

22.在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀，加热后溶解。它是什么？对我的细胞有害吗？
    可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的浓度比在RPMI 1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加难以溶解。沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解，对实验不会有不利的影响。

23.如何从T25瓶中转移sf9细胞？能用胰蛋白酶消化吗？
    我们QL推荐使用脱落细胞的方法，因为这项技术破坏性*小，生活力*高。通过使用巴氏德吸液管，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在**必要的情况下，才使用胰酶消化细胞。
胰酶消化一个T25瓶的sf9细胞：
1)去除培养基。
2) 用2ml 1xPBS（足以覆盖细胞表面）洗涤细胞，去除PBS.
3) 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆盖细胞表面）。
4) 37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。
5) 向细胞中加入2ml 细胞培养液，移入锥形管，用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥形管中。（培养基中的FBS终止了胰酶的活性。）
6) 离心（1100rpm）沉淀细胞。去除培养基。
7) 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。

24.在Sf9, Sf21, 和high Five细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？
    为了防止悬浮培养细胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。

25.如何评估ES细胞合格的胎牛血清？
    使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长YZ和分化因子非常敏感的细胞系。
相关生长效率分析：
    当ES细胞以非常低的密度传入包含10％胎牛血清的生长培养基中，检测开始和支持ES细胞克隆的能力。
细胞毒分析：
    当以非常低的密度传入包含30％胎牛血清的生长培养基中，检测ES细胞和feeder细胞的生长能力。

相关形态学和分化分析：
    检测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程度。未分化的ES细胞小颜色深红粉红，分化的细胞较大，丰满，颜色较浅。
    所有的分析在没有ESGRO的情况下进行的，培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛血清所导致的问题。（ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。）
    经过培养发现，大约8批中有1批可以用来培养ES细胞。

 

26.在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的感染能力会降低吗？
    通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候记数时，都应该检查细胞活力。如果超过95％的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是有效的。

注：以上资料均来自网络，仅供参考。