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- 【导读】 各种细胞免疫检测方法比较 类型 检测名称
- 各种细胞免疫检测方法比较类型检测名称检测方法主要特点体内功能检验迟发型超敏反应法皮下注射抗原或者负载抗原的DC,观察红斑、硬块的发生与大小优点:体内功能性检验,相对比较容易操作;缺点:只是一种初筛,加阳性与假阴性比较严重。体外表型检测TCR可变区分析法使用针对T细胞受体(TCR)可变区的流式抗体来对表达特定可变区的T细胞计数优点:可以提供关于可变区使用的群体分布;缺点:识别同一种抗原的TCR的可变区可能不相同;单抗不够丰富,不能检测所有种类的可变区。多肽MHC五聚体法(Tetramer)用荧光标记的MHC-肽五聚体去结合T细胞,进而做流式分析优点:能做精细分析,灵敏较高;缺点:只能分析MHC-I类分子,四聚体制备复杂,成本高昂,需要预先合成T细胞表位肽。TCR CDR3序列分析用PCR的方法扩增T细胞受体互补决定区3的序列,测序特点:简单灵敏,但还不能用于群体分析;该方法目前刚刚开展,还不能全面评价。体外功能检测细胞因子ELISPOT法抗原与待测PBMC混合,通过ELISPOT检测阳性细胞频率优点:灵敏度*高,单细胞水平,特异性强,结果直观可信,成本低,高通量;缺点:血液PBMC的分离还未实现自动化;还有待于发展双因子、多因子ELISPOT技术。淋巴细胞增殖试验(3H胸苷掺入法)待测PBMC、辐射过的APC、抗原混合孵育,特异性的T细胞增殖,通过掺入的3H胸苷来确定增殖水平优点:是传统方法,研究比较透彻;缺点:需要放射性操作,非特异性反应比较强,并且灵敏度低。细胞内细胞因子染色法抗原与待测PBMC混合,把细胞因子保留在细胞内,然后用流式抗体染色、计数优点:单细胞水平,可以同时检测多个参数、多种因子;缺点:操作复杂,灵敏度相对较低,容易出现假阳性。细胞因子ELISA法抗原与待测PBMC混合,然后用定量ELISA法测量细胞受刺激而分泌到上清液中的细胞因子浓度优点:特异性强,可以对细胞因子浓度定量,有以全血作为检测样品的潜力;缺点:只能做群体水平检测,灵敏度不够高。细胞因子mRNA定量法通过定量RT-PCR方法检测受刺激的细胞中细胞因子mRNA的水平优点:有利用各种组织样品的潜力,灵敏度高,高通量;缺点:容易出现假阳性,只能做群体水平检测。CTL杀伤法(51Cr释放法)制备51Cr标记的表达抗原的靶细胞,与待测PBMC混合,通过51Cr释放来确定靶细胞被杀伤的水平优点:*直接的功能性检测;缺点:靶细胞制备困难,试验周期长,需要放射性操作,灵敏度低。极限稀释计数CTL法待测PBMC稀释到一系列孔中,体外增殖,然后加入靶细胞判定每孔裂解的阴阳性,*后通过泊松统计法确定CTL极限稀释倍数优点:对CTL的频率计数比直接CTL杀伤法更准确,灵敏度也有所提高;缺点:实验及其复杂,工作量极大,并且因为有些CTL前体细胞不能增值而导致结果偏低。
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- 2006-10-13 09:45:36
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