生化分析仪常用分析方法

生化分析仪的常用分析方法

生化分析仪通常使用三种主要的分析方法，即终点法，固定时间法和动力学法。

终点法：指经过一段时间的反应后，反应达到平衡，因为该反应的平衡常数非常大，可以认为所有底物（分析物）都转化为产物，并且反应溶液的吸光度不再变化，仅与反应物的浓度有关。这种类型的方法通常称为“终点”方法，或更确切地说，称为“平衡”方法。

单试剂单波长终点法：在t1处添加试剂（体积V），在t2处添加样品

（体积为S），搅拌并反应，然后开始测量反应溶液的吸光度，

反应在t3结束，t3-t2为测量时间。

反应性R ＝ At3-At2-1×V /（V + S），或R ＝ At3-ARBLK。

其中：Ati是时间i的吸光度，ARBLK是试剂空白的吸光度。

单试剂双波长终点法：与“单试剂单波长终点法”基本相同，不同之处在于每个测量周期的实际吸光度等于Aλ1-Aλ2。

双试剂单波长终点法：在t1处添加**试剂（体积V1），在t2处添加样品（体积S）并立即搅拌，在t3处添加第二种试剂（体积V2）并立即搅拌，反应达到在t4结束。 t3-t2是孵育时间，t4-t3是测量时间。

在项目参数中，如果反应开始时间设置为0，则反应度R =在时间A处的吸光度-试剂空白吸光度的两倍。如果反应开始时间小于0，则在t3与t2之间的设定点的反应度R ＝ At4-双重试剂空白吸光度×（V1 + S）/（V1 + S + V2）。

双试剂双波长终点法：与“双试剂单波长终点法”基本相同，不同之处在于每个测量周期的实际吸光度等于Aλ1-Aλ2。

固定时间方法：也称为**动力学方法，两点动力学方法等，这意味着在一定的反应时间内，反应速度与底物浓度的一阶幂成正比，即v = k [S]。由于底物的连续消耗，整个反应速率连续降低，这表现为吸光度的变化越来越小。这种反应需要很长时间才能达到平衡，理论上可以在任何时间段进行监控。然而，由于复杂的血清组成，当反应开始时反应更加复杂，并且存在许多其他反应，并且必须经过延迟时间才能进入稳定的反应阶段。

在t1加入试剂（体积V），然后测量试剂空白的吸光度，在t2加入样品（体积S），在t3反应稳定，在t4停止监测反应； t2-t3是延迟时间，t3-t4是测量时间。

单波长反应性（与单试剂和双试剂相同）：R = At4-At3

双波长响应：R =（t4处的主波长吸光度，t4处的子波长吸光度）-（t3处的主波长吸光度，t3处的亚波长吸光度）

动力学法：也称为零级动力学法，这意味着反应速度与底物浓度的零次方成正比，即与底物浓度无关。因此，在整个反应过程中，反应物可以均匀的速度产生某种产物，导致被测溶液在一定波长下的吸光度均匀下降或上升，下降或上升的速率（ΔA/ min ）与被测物有关。活性或浓度成正比。动力学方法也称为连续监测方法。它主要用于测定酶的活性。

事实上，由于底物的浓度不能足够大，所以随着反应的进行和底物的消耗达到一定程度，反应速度不再是零级的。因此，零级动力学方法是针对特定时间段的。同样，由于复杂的血清组成，反应在反应开始时更加复杂，并且存在许多其他反应。必须经过一个延迟时间才能进入稳定的反应阶段。每个试剂制造商在这两个时期都有严格的规定。

在t1加入试剂（体积V），在t2加入样品（体积S），在t3反应稳定，在tn停止监测反应。 t3-t2是延迟时间，tn-t3是测量时间。单波长反应性（与单试剂和双试剂相同）R =（n∑AT-∑A∑T）/ [n∑T2-（∑T）2]，其中：n = t3和tn之间的数据数，T =时间，A =特定时间的吸光度。双波长响应与单波长响应基本相同，除了在特定时间的吸光度等于主波长的吸光度减去次级波长的吸光度。