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- 【导读】方法概要:在婴幼儿配方食品和乳粉中加入适量的脂酶,酶解后用NaOH 皂化,用正己烷萃取,蒸干后用正己烷溶解,用高效液相色谱柱后衍生法(HPLC-锌粉还原柱)用荧光检测器定量测定维生...
方法概要:在婴幼儿配方食品和乳粉中加入适量的脂酶,酶解后用NaOH 皂化,用正己烷萃取,
蒸干后用正己烷溶解,用GX液相色谱柱后衍生法(HPLC-锌粉还原柱)用荧光检测
器定量测定维生素K1。
关 键 词:婴幼儿配方食品,乳粉,HPLC,锌粉还原柱
参考方法:采用即将替代GB/T5413.10-1997 的新国标(还没有正式公布)
方法步骤:
1、 试剂和耗材:HPLC 级正己烷(CAEQ-4-011518-2500 );无水硫酸钠(CBEQ-4-103502-1000 );HPLC
级甲醇(CAEQ-4-003302-4000 );HPLC 级冰醋酸(乙酸,CAEQ-4-011245-0500);HPLC 级二氯
甲烷(CAEQ-4-012001-4000);维生素K1 标准品(CDCT-C17924400 )
2、 提取:称取约2.5 g(精确到0.1mg)混合均匀的试样于三角瓶中(含淀粉的试样加入0.5g 淀粉酶),用
30ml 温水溶解,加入1g 酯酶,于37℃恒温空气震荡器中震荡过夜,使其充分酶解。然后加入2ml 10mol/L
氢氧化钠溶液,转移至500ml 的分液漏斗中,加入50ml 乙醇,充分混匀。再加入50ml 正己烷,加塞振摇
2min,静置分层。放出下层于另一个500ml 分液漏斗中再次加入50ml 正己烷萃取,静置分层,弃去水相,
合并正己烷。加入适量蒸馏水洗有机相两次,弃取水相,将正己烷通过无水硫酸钠过滤到500ml 的平底烧
瓶中,在旋转蒸发器上40℃下蒸发至近干,用正己烷转移残留物到10ml 指形瓶中,用氮气吹干,准确加
入1ml 正己烷,充分振荡溶解残留物,得到待测液,在冰箱中冷冻一小时后备用。
3、 HPLC 测定方法:
4.1 色谱柱:Cnwsil C18,150×4.6mm, 5μm(LAEQ-1815004605)
4.2 衍生柱:锌粉还原柱,35×4.6mm(LAAA-0001)
4.3 流动相:甲醇900ml,二氯甲烷100ml,冰醋酸0.3 ml,氯化锌1.5g,无水乙酸钠0.5g,溶解过0.45
滤膜。
4.4 进样量:10 μL
4.5 流 速:1.0 mL/min
4.6 检测波长:荧光检测器:波长EX=243nm EM=430nm
上海安谱科学仪器有限公司 Tel:021-54890099
Shanghai ANPEL Scientific Instrument Co., Ltd. 网站:www.anpel.com.cn Fax:021-54248311
4、结果分析:
4.1、分析图谱
VK1 标准溶液色谱图(荧光检测器)0.4ug/ml VK1 标准溶液色谱图(荧光检测器)0.04ug/ml
婴幼儿配方色谱图(荧光检测器)
5.2、结果分析
用Cnwsil C18(150×4.6mm, 5μm)色谱柱和锌粉还原柱(35×4.6mm)串联柱后衍生法分析婴幼
儿配方食品中的维生素K1,分离效果良好,峰形对称,重复性好。- 2004-07-10 09:35:13
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