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- 【导读】建立佐剂诱导的大鼠关节炎模型 ...
建立佐剂诱导的大鼠关节炎模型
建立佐剂诱导的大鼠关节炎模型
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一个累及周围关节为主的多系统性、炎症性的自身免疫疾病,其特征性症状为对称性、周围性多个关节慢性炎症病变,其发病机制十分复杂,迄今尚未完全阐明。
佐剂性关节炎模型是Freund于20世纪50年代创立的,又称弗氏佐剂关节炎,弗氏佐剂分为完全佐剂(CFA)和不完全佐剂(IFA)。其机制是结核杆菌致关节炎抗原为65 kD热休克蛋白(HSP),RA病人软骨内具有与65kD HSP相似的蛋白多糖桥联蛋白抗原成分,FCA注入激活T细胞,激活T细胞参与RA发病机制。此模型存在明显的细胞免疫异常,为一种典型的免疫性炎症模型,并且制作方法简单,可广泛应用于多种动物,便于研究者选择应用。研究表明,在 RA 发病过程中,促炎细胞因子(IL-1,TNF-α,IFN-γ,IL-2 等) 和KY细胞因子 (IL-4,IL-10,TGF-β 等) 的不平衡占有重要地位,其中 IL-1 和 TNF-α 参与多种病理学过程,在发病机制中尤为重要。
1.实验动物
SPF级Wistar大鼠,雄性,体重为180g-220g。随机分为对照组10只和模型组20只。
2.主要试剂
完全弗氏佐剂(CFA)(Sigma公司)
3.建模方法
抓取大鼠,于右后足皮内注射 0.1 mL CFA 致炎,从而建立大鼠佐剂性关节炎模型;对照组右后足趾皮下注射0.01moI/L 冰醋酸 0. 1mI,以排除 CFA 中溶剂的致敏效应。
模型的评价
4.1体质重测定:分别于0d、7d、14d、21d、28d记录大鼠的体重,比较模型组大鼠体重和对照组大鼠的体重变化;
4.2免疫评价:
称量大鼠体重,处死大鼠,取出脾和胸腺,生理盐水漂洗后用纱布吸干表面水分,分别于电子天平上称质量(湿质量),并计算脏器指数。
脏器指数 = 器官湿质量(mg) /大鼠体重(g)
4.3足跖肿胀值(mm)测定:
足趾肿胀度是佐剂性关节炎测量的一个重要指标。0d时在大鼠足跖同一地方做标记,用电子游标卡尺以标记为准,测定大鼠足跖厚度,以后每隔7d(7、14、21d和28d时)再分别测量,进行自身左右侧足跖对照和组别间对照。
4.4关节炎指数(arthritisindex index,AI)评价:
采用关节炎指数积分评价其关节炎症程度。除了诱导部位右后足以外,根据其余3只未注射的肢体病变程度和趾间是否发炎对每一足爪分别进行打分,以0~4分记录,累积得分即为每只大鼠的关节炎指数。
0分:无红斑和肿胀的证据;
1分:红斑和轻度肿胀局限于足中段或踝关节;
2分:红斑和轻度肿胀从踝关节蔓延至足中段;
3分:红斑和轻度肿胀从踝关节蔓延至关节;
4分:红斑和重度肿胀包括了踝、足和趾;
4.5病理组织学观察:
处死大鼠,留取剔除软组织的后肢踝关节,固定、脱钙、包埋、石蜡切片后行HE染色作组织学观察。正常大鼠踝关节结构正常,无炎性细胞浸润,滑膜细胞排列整齐,软骨表面光滑,关节腔内未见渗出液;模型组大鼠关节破坏明显,周围大量中性粒细胞浸润,滑膜增生肥厚,纤维组织增生,软骨及骨骼损伤。
4.6大鼠血清中 炎症因子含量测定:
大鼠3%钠麻醉后,于下腔静脉取血1ml,静止30min, 4℃离心机4000r/min离心30min,分离出上层血清,置-80℃冰箱保存备用。使用ELISA试剂盒检测TNFα、IL-1β等细胞因子的含量。
4.7统计学处理
应用SPSS软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x ±s)表示,采用t检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有显著性差异,P<0.01表示有极显著性差异。
- 2004-07-12 15:05:27
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