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- 【导读】使用步骤1.将XtimateSugar-Ca保护柱连接在分析柱和进样器之间;2.设置流速在0.2-0.3ml/min直到柱温达到分析温度;3.在柱温达到分析温度前,流速变化应该以0...
使用步骤
1.将XtimateSugar-Ca保护柱连接在分析柱和进样器之间;
2.设置流速在0.2-0.3ml/min直到柱温达到分析温度;
3.在柱温达到分析温度前,流速变化应该以0.1ml/min为增量,待柱压稳定后再继续增加流速。Zda流速应使柱压不超过2000psi。流动相要求
此保护柱由钙基树脂填装而成,氢离子和其它离子会取代钙离子,或是引起与柱中糖的置换,尤其是像蔗糖这样易于置换的糖。因此推荐在流动相中加入一定量的钙离子来保持平衡和防止与样品的置换。推荐的流动相用去离子的无菌水,含EDTA钙盐0.0001M(50mg/L)。水应去离子化,大于2兆欧的电阻率,水中应不含多价离子,尤其是过渡金属元素和重金属离子,使用前需用真空泵通过0.45μm或更小孔径的滤膜除去细菌和其它颗粒,溶剂过滤推荐使用溶剂过滤器,合适的滤膜为Millipore的HAWP04700。
虽然流动相已经在真空过滤时脱气,但还是应该通过以下程序来完全脱气。如果系统连续使用不止一天,请将流动相置于锥形瓶中,放在搅拌器/电炉上,用铝箔封上瓶口以减小蒸发,用前将流动相加热至沸点几分钟,使用时保持温度70-90℃。这个操作能够保证气体(尤其是CO2)不再重新溶解在流动相中,同时也会防止微生物的滋生。
要保持装流动相的容器干净,有盖,且新鲜,流动相需每24小时重新配制。注意事项
通常推荐压力不超过2000psi;
Zda流速不超过2ml/min(70℃);
流动相中有机相的Zda含量为5%(V/V),样品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和异丙醇不会影响柱子的性能;
柱子的温度不要超过95℃。通常高温会带来高的分辨率,但在90-95℃之间几乎没有变化,70℃以下对于许多糖,就异构体的分离来说
不能提供足够的分辨率,对于乙醇的定量,柱温应在75℃;
柱温的快速变化不会对柱子带来什么反作用,如果柱子在60℃以下,那么太高的流速会引入高柱压,由于水在低温时有高的粘度因此高的流速会带来很高的反压;
定期反向冲洗色谱柱(在每5L流动相之后),这将会有效地延长色谱柱的寿命;
流速的变化不能超过0.5ml/min,流速变化应该缓慢进行,建议改变流速时以0.1ml/min为增量,直到反压稳定后再继续增加流速。任何的流速变化均要在不超过0.5ml/min下进行;在溶剂输出系统中压力限制的设定应比普通的工作压力高出几百psi,从而避免任何仪器未被注意的额外压力升高。
保存条件
长期保存(72小时以上不用)。关掉柱温箱,停泵。当柱子冷却,从系统中移出,换上起初随柱子的堵头,柱子在保存过程中要防止挥干,通常的流动相都可作为保存柱子的适宜溶剂。在冰箱中5℃保存(不要冷冻),以防止微生物的滋生;柱子拆掉后要用不锈钢堵头装在系统上,冲洗整个液相色谱系统先用水,然后用甲醇,Z后系统保存在甲醇中。在关机后的重新启动。当开启带有一个柱温很低的柱子的系统时,打开柱温箱,流速开始不要超过0.2ml/min。待系统在此条件下稳定至少二十分钟达到工作温度后再按通常的工作条件操作。
整夜的停机(放置少于72小时)。柱子留在系统中流速降到0.2ml/min。循环溶剂,将流出的管路插入流动相瓶中,如果不想开着柱温箱,那就关掉泵和柱温箱让其冷却。
在整夜停机后的开启。打开柱温箱,流动相的流速不要超过0.1-0.2ml/min,保持此流速至少二十分钟直到达到柱子工作所需温度,然后再按照通常分析条件来设置。
故障检查
Sugar-Ca保护柱是以树脂的膨胀形态紧密装填的,如果样品进行了很好的前处理,那么大部分产生的问题都和树脂填料有关,由于单向阀的损坏或是突然地反压增加,脆弱的树脂填料可能被泵的波动冲到柱子的后筛板处。反压的增加是否会发生,要经常检查在线过滤器以及保护柱中是否截留了微粒。如果不是此问题,那么很可能是树脂部分地堵在了出口端的筛板处,检查这种情况是否发生需要关掉泵,将柱子的流路方向反过来,然后泵流速开到0.1ml/min,20分钟达到工作温度后再设至工作时的流速。柱子的再生步骤
当主峰峰形有所变化,柱效有所降低时,需要进行再生;
Sugar-Ca保护柱的再生方法与Sugar-Ca分析柱方法一致,根据相关的样品纯度有不同的变化,越是天然物(尤其是含有那些重金属和过渡金属元素或是有机酸的样品),越需要经常地对柱子进行再生,因为它们会与柱子发生置换。可以通过注射蔗糖来测试柱子的置换情况。如果蔗糖的峰有拖尾,那么柱子需要做以下处理:
配制500ml的再生溶液(CaEDTA500mg/L),把柱子流路方向反过来,在90℃下以0.5ml/min的流速冲洗一整夜。再生之后回到正常方向使用。
当柱子反冲时很重要的一点是需要保持溶剂的温度从而确保正确的冲洗,用冷的溶剂将会延缓冲洗的过程。如果再生对峰形没有很好的改善,请更换保护柱。
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- 2004-08-20 09:23:04
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