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- 【导读】DNA转染试剂说明书DNAFectTransfectionReagent目录号:YJ0860保存:2-8℃组分说明Catalogno.YJ0860YJ0860AKitSi...
DNA转染试剂说明书
DNAFectTransfectionReagent
目录号:YJ0860
保存:2-8℃
组分说明
Catalogno.YJ0860YJ0860A
KitSize0.5ml1ml
DNAFectTransfectionReagent0.5ml1ml
产品简介
DNAFect是一种GX的阳离子脂质体转染试剂,适用于多种细胞的DNA转染。对于大多数细胞系包括原代细胞都有较高的转染效率,并且对细胞毒性极低。本转染试剂可应用于瞬时转染、稳定转染、共转染、高通量DNA转染,基因表达和基因功能研究。
注意事项
1.转染试剂使用前应先震荡摇匀。
2.转染效率与细胞密度有很大关系,不同实验间应保持一个基本的传代步骤,确保转染时细胞没有长满或处于静止期。
一般贴壁细胞转染的Z佳细胞密度是80-90%,悬浮细胞的Z佳细胞密度为3-5×105细胞/ml,用于转染的Z佳细胞密度
3.转应染根据不同的时不要在培细养胞基中加入抗生素,否类型或用途而异。则会导致细胞死亡。
操作步骤
对于大部分的细胞系,DNA与DNAfect的比例在1:2至1:3时转染效率较高。为了提高转化效率、表达水平并且减少细胞毒性,实验应在细胞密度较大时进行转染。以下操作以24孔板每孔细胞的DNA转染操作为例。
1.贴壁细胞:转化前一天,在24孔板的每孔中加入500μl无抗生素的生长培养基,并于每孔中接种0.5-2×105个细悬浮细胞:在胞,待细胞转细染之前,在胞长至80-90%24孔板的满时进每行孔中加入转染。500μl无抗生素的生长培养基,并于每孔中接种3-5×105个细胞。
2.转染当天,首先准备转染复合物,对于每孔细胞按照以下用量配制:
a.取适量DNA,加入25μl无血清培养基,并轻轻的混合均匀。
b.取适量DNAfect,加入25μl无血清培养基,轻轻混匀,并于室温孵育5分钟。
c.孵育5分钟之后,将稀释的DNA和稀释的DNAfect混合(使DNA以及DNAfectin的终总体积为50μl),轻轻混合均匀,并在室温下孵育20分钟(溶液可能会出现絮状,但不会影响转染效率)
注意:该混合物在室温下可以稳定保存6小时。
3.将步骤1中24孔板中培养的细胞生长培养基更换成450μl无血清培养基,然后将步骤2中50μl转染复合物加入到24细胞孔板内,轻轻前后推动24孔板以混匀。
4.将细胞置于含5%CO2,37℃条件下培养4-6小时后,更换成500μl生长培养基。
5.18-48小时后进行转染基因表达的检测。
6.对于稳定的细胞系:在转染24小时后,细胞按照1:10的比例传代,第二天可加入筛选培养基进行筛选。
注:(1)该说明为一个24孔的用量,若同时转几个孔,配制转染复合物的量需加倍;若转染其他类型孔板,DNA和DNAfect用量见附表,
该附表用量以293T细胞为转染细胞时的标准用量。
(2)转染4-6小时后也可以不更换生长培养基,但由于DNAfect具有一定的细胞毒性,作用时间过长可能使某些细胞出现大量死亡现象,建议更换生长培养基。
(3)优化条件:想要得到更高的转染效率,应优化转染条件:培养物、DNA浓度、细胞数和细胞与DNA复合物的孵育时间等条件都应进行优化。
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- 2004-08-31 09:23:06
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