超声波破碎细胞的注意事项

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【导读】 1.在大肠杆菌表达外源蛋白试验中，使用超声波破碎仪破碎的注意事项： 1）会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部0.5mm）。功率...

1.在大肠杆菌表达外源蛋白试验中，使用超声波破碎仪破碎的注意事项： 1）会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部0.5mm）。功率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。2）破3S停10S，破二十至三十才查看一下效果。3）尝试超8s停8s，对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，Z好停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。4）变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在超声波破碎仪破碎时试着加大体积,强度Z好不要超过60%. 2.超声波破碎仪破碎链霉菌（放线菌）试验前的准备事项：（1）取细菌的24h培养液于5000r／min下离心5min收集菌体．（2）用pH7．5的Na2HPO-NaH2PO缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液．置于40mL大塑料试管内．（3）将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎（功率200W，1／2”探头，破碎30s，间歇30S）．（4）破碎液于12000r／min下高速冷冻离心30min，收集细胞碎片和上清夜．超声破菌流程与上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就可以。另外，超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到400－600w，超5s，停5s，冰浴，要加终浓度1mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数，有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。放线菌属于原核生物系统进化树上的（G＋C）摩尔百分含量（mol％）高的革兰氏阳性菌（Eubacteria）分枝类群，它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性，但在其不同类群中，细胞壁的化学组分变化很大.

超声波细胞破碎仪：http://www.biosafer.cn/productlist-T41.html
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2004-07-14 10:19:49

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