酵母蛋白抽提试剂盒的注意事项有哪些？

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【导读】1、第一次使用酵母蛋白抽提试剂盒前应按照试剂瓶标签的说明在漂洗液中加入无水乙醇配制成工作液。2、溶液YP1在使用前先加入RNaseA，将试剂盒中提供的RNaseA全部加入，混匀，置...

1、diyi次使用酵母蛋白抽提试剂盒前应按照试剂瓶标签的说明在漂洗液中加入无水乙醇配制成工作液。2、溶液YP1在使用前先加入RNaseA，将试剂盒中提供的RNaseA全部加入，混匀，置于2-8℃保存。3、质粒得率与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关。通常酵母质粒拷贝数都很低，酵母蛋白抽提试剂盒一般通过电泳或分光光度计法都很难检测到，可通过PCR或转化大肠杆菌来检测。4、使用前请先检查溶液YP2和溶液YP3是否出现混浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。5、得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。6、洗脱缓冲液体积不应少于50ul，体积过小影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右，可用NaOH将水的pH值调至此范围，pH值低于7.0会降低洗脱效率；酵母蛋白抽提试剂盒在DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少。

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2004-09-08 09:23:04

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