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广州洁特 重组蛋白A/G预装柱/填料
- 品牌:广州洁特
- 货号:
- CAS编号:
- 产地:广州
- 供应商报价: 面议
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广州洁特生物过滤股份有限公司
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企业性质
入驻年限第9年
营业执照
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- 详细介绍
产品介绍:
通过基因重组技术,将蛋白A与蛋白G基因重组于同一质粒载体中,并在大肠杆菌中进行表达,得到分子量为50.5KDa的可溶性蛋白A/G。该可溶性蛋白A/G具有四个IgG结合位点,来自于蛋白A;和两个IgG的结合位点,来自于蛋白G。因具有上述特性,使得基因工程重组蛋白A/G具有广泛的IgG的结合能力,对各种哺乳类动物的IgG都能结合,使得该产品在IgG的诊断和纯化中具有十分广泛的用途。
本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术,将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化,使得单位体积中结合更多蛋白A/G,产品zui终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A或蛋白G、蛋白A/G偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化,或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。
产品技术指标
rec-Protein A/G per Sepharose 4FF 比值:4.0-4.5mg rec-Protein A/G per ml Sepharose 4FF
rec-Protein AG分子量:50.5 KDa
每分子rec-Protein G可结合IgG位点数:6个(4个来自于蛋白A,2个来自于蛋白G)
rec-Protein A可结合白蛋白位点数:无
线性流速:300-500 cm/h
耐压指数:≤0.3 MPa(填料)
l 注意事项
请在实验前仔细阅读本rProtein A预装柱使用说明。同时,将所要的所有试剂、耗材拿出置于室温,恢复至室温使用。
l 产品保存
产品储存于2-8℃,保质期两年。
l rProtein A/G-Sepharose 4FF纯化IgG抗体步骤
以下方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体,不同来源的IgG与rProteinA/ G的结合能力不同,具体情况请参考表1。
1. 将血清或腹水样品(推荐上样量2 mL样品/mL柱)装入截留分子量3.5 KDa透析带中,于4 ℃冰箱中对1× PBS(pH 7.4)透析过夜;
2. 将rProtein A/G-Sepharose 4FF装柱固定好,用10倍柱体积1× PBS(pH 7.4)平衡层析柱,建议流速为1 mL/min;
3. 将透析好的样品从层析柱上端加入,建议流速为1 mL/min,为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样,重复2遍(或者是将样品1次性加入层析柱后置于摇床上,轻轻摇动,结合30 min);
4. 样品结合后,用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱,建议流速为1 mL/min,勿让层析柱滴干;
5. 洗脱IgG,向层析柱上端加入洗脱液(100 mM甘氨酸,pH 2.7),用预先加有100 μL中和缓冲液(1M Tris,pH 9.0)的4 mL Ep管接收,2 mL /管,共收集10倍柱体积,进行10 % SDS-PAGE电泳,确定IgG样品所在管,回收样品。
6. 加入5倍柱体积再生缓冲液(100 mM甘氨酸,pH 2.0),再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。 向层析柱加入10倍柱体积, 20% Ethanol,于4~8 ℃冰箱。
表1 rProtein A/G 与Ig结合能力情况
IgG类型
Protein A
Protein G
IgG类型
Protein A
Protein G
人 IgG1
++++
++++
大鼠 IgG2b
-
++
人 IgG2
++++
++++
大鼠 IgG2c
+
++
人IgG3
-
++++
大鼠 IgM
+/-
-
人IgG4
++++
++++
兔 Ig
++++
+++
人IgA
++
-
鸡 Ig
-
+
人n IgD
++
-
仓鼠 Ig
+
++
人IgE
++
-
豚鼠 Ig
++++
++
人 IgM
++
-
牛 Ig
++
++++
小鼠 IgG1
+
++++
马
++
++++
小鼠 IgG2a
++++
++++
奶牛
++
++++
小鼠 IgG2b
+++
+++
猪
+++
+++
小鼠 IgG3
++
+++
绵羊
+/-
++
小鼠 IgM
+/-
-
山羊
-
++
大鼠 IgG1
-
+
大鼠 IgG2a
-
++++
表2 rProtein A/G预装柱系列产品参数特性
rProtein A/G
特性
rProtein A
柱体积规格
1mL,5mL
填料稳定性
>20纯化周期
基质组成
4%高交联度琼脂糖
pH稳定性
pH 2~11
基质平均粒径
90μm
推荐工作pH范围
pH 3~10
功能基团
rProtein A/G:50.5kDa;
IgG结合位点:6个
推荐在位清洗pH范围
pH 2~11
配基密度
≈3mg rProtein A/mL 基质
工作温度
4~40℃
结合能力
35-50mg人IgG/mL填料
运输条件
20%乙醇浸泡,室温运输
推荐流速
30~150cm/mL
贮藏条件
20%乙醇条件下,
4~8℃保存
重组蛋白A/G预装柱
目录号
规格(ml)
备注说明
PAG000001
1
手动
PAG000005
5
手动
PAG100001
1
自动
PAG100005
5
自动
重组蛋白A/G填料目录号
规格(ml)
PAG001005
5
PAG001025
25
PAG001100
100