培养方法

Calu-1 人肺癌细胞 

贴壁，上皮细胞样

编号： 340251

产品形式： 2mL 冻存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶 ；

安全等级： 一级，安全柜或超净台操作

培养：37℃，5%CO₂ CM5-1 培养液

收货须知：收货当天发现异常，请在 24 小时内及时联系客服，逾期视为收货良好；冻存管形式，收货后及时置于-80℃冰箱保存，若 长时间不使用，应过夜转移至液氮保藏；T25 形式，收货后先培养瓶原装置于培养箱静养 4h，然后再对细胞进行常规操作。复苏时每 管一次用完不得留存，复苏后传一代，即可正常使用。请严格按照本说明操作，否则造成细胞失活等情形，不予提供补发服务。

培养条件：37℃，5%CO₂，CM5-1 培养液。CM5-1 培养液：90%Mc Coy’s 5a+10%FBS。Mc Coy’s 5a：Mc Coy’s 5a 培养液。

复苏步骤：

①新制 100mm 平皿 1 个，含 12mL 上述培养液；

②冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后尽快移入 安全柜复苏；

③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀；

④放入（37℃，5%CO₂）培养箱中，过夜换液，2-4 天长满。

传代/冻存：将旧培养液吸除，PBS 清洗两遍后，加入 2mL（/100mm 皿/T25 瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在显微镜下观察， 期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，吸除大部分胰酶，留约 0.5mL，移至培养箱消化，约 3min 取出。

①传代：用 6mL CM5-1 培养液终 止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分 3~6 皿培养；

②冻存：用 3mL 冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为 3 支冻存管， 用程序降温盒于-80℃冻存。

复苏质量记录：根据复苏要求，对以上细胞株进行复苏，记录结果如下： 

项目	质量标准	复苏记录
复活性	12h 贴壁，96h 长满 80%	过夜 18h 后观察贴壁，66h 密度达 70%
细胞形态	贴壁，上皮细胞样	CM5-1 培养液中，贴壁，上皮细胞样，梭形、长条形
附图
结论	复活性好，且细胞形态无异常，合格

质检员/日期： 张宜路 2019.12.19              审核员签字：苏丹