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沙门氏菌血清型分子鉴定试剂盒(PCR-探针法)
- 品牌:山东美正
- 货号:
- CAS编号:
- 产地:日照
- 供应商报价: 面议
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山东美正生物科技有限公司
更新时间:2024-08-14 11:13:45
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- 详细介绍
- 概述
沙门氏菌血清型分子鉴定试剂盒采用实时荧光PCR技术,针对沙门氏菌血清型特异性基因设计引物和探针。PCR扩增过程中,与模板结合的探针被Taq酶分解产生荧光信号,荧光定量PCR仪根据检测到的荧光信号绘制出实时扩增曲线,从而实现沙门氏菌血清型在核酸水平上的鉴定。
检测步骤1、核酸提取
加热法:刮取至少10个菌落,悬浮于100μL的无菌水中,漩涡震荡10s(如果菌落未能均匀分散,可适当延长震荡时间),95℃或沸水浴5min,冷却至室温,12000rpm离心5min,吸取上清。
试剂盒法:可使用商品化的试剂盒提取沙门氏菌的基因组DNA。
2、反应体系配置
从试剂盒中取出预混液,充分融化,涡旋后短暂离心,取22.5μL置于PCR管或PCR板中,然后各取模板2.5μL分别加入PCR管或PCR板中(每种模板要使用十二种预混液),盖好管盖或板膜,短暂离心,立即进行PCR扩增反应。
3、PCR扩增
PCR管或PCR板置于PCR仪上,推荐反应程序设定如下:反应体系为25μL,在第二步每个循环60℃时检测荧光信号,检测通道选择FAM、HEX(VIC)、CY5。
DY步
第二步
1个循环
40个循环
95℃
95℃
60℃√
72℃
10 min
20s
60s√
30s
注:使用ABI系列PCR仪器,如果不添加ROX,“passive reference”和 “quencher”均选择“none”。
- 主要用途