甲硝唑ELISA检测试剂盒

甲硝唑ELISA检测试剂盒原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测组织、蜂蜜等样本中的甲硝唑（Metronidazole，MNZ），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的甲硝唑和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗甲硝唑抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含甲硝唑含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中甲硝唑的残留量。

甲硝唑ELISA检测试剂盒技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：1.5ppb(ng/ml)

2.2 反应模式：25℃ 30min～30min～15min

2.3 检测下限：

组织（鸡肉、鸭肉、肝脏、鱼、虾等）………1.5ppb

蜂蜜、牛奶………………………………………1.5ppb

鸡蛋 ………………………………………………3ppb

2.4 交叉反应率：

与类似物的交叉反应率：

甲硝唑(MNZ) ………………………………………100%

二甲硝咪唑DMZ……………………………………68%

2.5 样本回收率：

鱼/虾/禽/肝脏…………………………………90±10%

蜂蜜、牛奶、鸡蛋……………………………90±10%

3 试剂盒组成

酶标板……………………………96孔

标准液（黑盖）：各1ml

0ppb、1.5ppb、3.0ppb、6.0ppb、12.0ppb、24.0ppb

高标准液：100ppb……………………1ml

抗体工作液 (蓝盖) ………………………………5.5ml

酶标记物 (红盖) …………………………………11ml

底物液A (白盖)……………………………………6ml

底物液B(黑盖) ……………………………………6ml

终止液(黄盖) ………………………………………6ml

20×浓缩洗涤液(白盖)……………………………40 ml

2×浓缩复溶液(黄盖) ……………………………50 ml

说明书………………………………………………1份

​酶联免疫试验步骤

   将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

2 加样反应：加标准品或样本100µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光反应30分钟。

3 洗    涤：将孔内液体甩干，用工作洗涤液350µl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

4 加酶反应：加酶标记物100µl/孔，25℃避光反应30分钟。

5 洗    涤：同上

6 显    色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。

7 终    止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。

8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

结果分析

1 百分吸光率的计算

标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光度值（%）＝A×100%

A0

A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值

2 标准曲线的绘制与计算

   以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。