呋喃唑酮代谢物检测试剂盒

一、呋喃唑酮代谢物检测试剂盒概要

硝基呋喃类药物因其具有价格便宜、抗效果好等特点,曾经被广泛应用，作为禽类、水产和猪促生长的添加剂。但在长时间的实验研究过程中发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，为了保证人类的食品安全,目前各国已禁止硝基呋喃类药物作为药物添加剂添加至动物饲料中。

二、原理

呋喃唑酮快速检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测蜂蜜、鱼、虾、禽、肝脏等中的呋喃唑酮代谢物（AOZ），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的呋喃唑酮代谢物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗呋喃唑酮代谢物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含呋喃唑酮代谢物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中呋喃唑酮代谢物的残留量。

三、适用范围

呋喃唑酮代谢物检测试剂盒可定性、定量检测动物组织（鸡、猪、牛、水产等）以及蜂蜜产品中呋喃唑酮代谢物的残留量。

四、技术指标

1 试剂盒灵敏度：0.02ppb(ng/ml)

2 反应模式：25℃，45min～15min。

3 检测下限：

组织、肝脏：0.04ppb       蜂蜜、牛奶、肠衣：0.04ppb

鱼/虾等水产品组织因有一定干扰，定量下限为0.1ppb

4 交叉反应率：

呋喃唑酮代谢物：100% 呋喃它酮代谢物：<0.1% 呋喃妥因代谢物：<0.1% 呋喃西林代谢物：<0.1%

5 样本回收率：

组织、肝脏： 80±25% 蜂蜜、牛奶、肠衣：75±15%

五、呋喃唑酮快速检测试剂盒组成

酶标板、标准液（6个）、高标准液、酶标记物、抗体工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩洗涤液、复溶液

六、贮藏条件及保存期

储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。

保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。

样本前处理

1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

2 配液：

配液1：0.36M亚硝基铁钠溶液（牛奶、奶粉样本）

10.7g亚硝基铁钠加去离子水混匀溶解，定容至100ml。

配液2：1.04M硫酸锌溶液（牛奶、奶粉样本）

29.8g硫酸锌加去离子水混匀溶解，定容至100ml。

配液3：0.1M  K2HPO4 溶液

称11.4g K2HPO4▪3H2O加去离子水混匀溶解，定容至500ml。

配液4：1M  HCL

8.6mL浓HCL加去离子水混匀，定容至100mL。

配液5：1M  NaOH溶液

称取4g NaOH，加去离子水混匀溶解，定容至100ml。

配液6：复溶液

将2×复溶液用去离子水2倍稀释（1份复溶液加1份去离子水），用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。

配液7:工作洗涤液

将浓缩洗涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。

样本前处理步骤：

1 牛奶样本处理方法

1）取5ml样本于离心管中，加250ul 亚硝基铁溶液（配液1）振荡混合30秒，加250ul 硫酸锌溶液（配液2）振荡混合30秒，15℃4000转/分离心10分钟；

2）取上清1.1ml，加4ml去离子水、0.5 ml 1M 盐酸溶液和100μl衍生化试剂，振荡5分钟；

3）在37℃过夜孵育(约16小时)或50℃（超过50℃时会影响分层效果）水浴孵育3小时；

4）分别加入5ml 0.1M K2HPO4 溶液，0.4ml 1M NaOH溶液和5ml的乙酸乙酯，振荡5分钟；

5）室温下4000转/分，离心10分钟；

6）取出2.5ml的上层液到另一个离心管中，50-60℃氮气或空气吹干；

7）用1ml正已烷溶解残留物，加入1ml复溶工作液充分振荡混合30秒；室温4000转/分，离心10分钟；

8）去除上层正已烷，取50μl下层液用于分析。