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pcr条带单一 无杂带 可否直接纯化pcr产物

容玩丑孕耗桨狭    2017-08-08    PCR纯化    浏览 435 次

精彩问答
yangle406 发布日期:2017-08-09
1.镁离子浓度

Mg2+浓度对PCR扩增反应的特异性和产量有着显著影响。PCR中常用的体系应Mg2+浓度为1.5mmol/L,但对不同的反应体系应优化Mg2+浓度。浓度过高,使反应特异性降低;浓度过低,使产物产量减少。PCR反应中Mg2+的加入量要比dNTP浓度高0.5-2.5mmol/L。Z好对每种PCR反应体系Mg2+量的优化。另外,还需注意引物和模板DNA原液中是否含EDTA等螯合剂影响游离Mg2+的浓度。

2.三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)

PCR反应中每种dNTP的终浓度为50-200μmol/L,在此范围内,扩增产物量、特异性与合成忠实性这间的平衡Z佳,dNTP浓度过低必然影响扩增产量,过高则会导致错误掺入,其浓度不能低于10-15μmol/L。由于dNTP的量还受其他因素的影响,所以不同反应体系中dNTP的Z佳浓度不尽相同。
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