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PCR产物测序要求Z低的浓度是多少

勤奋的带你走    2017-01-14    PCR纯化    浏览 702 次

精彩问答
heitiansh1 发布日期:2017-01-15
PCR产物测序要求Z低的浓度是多少
主要看的是PCR产物的量,已纯化一般要求总量500ng以上,未纯化1ug以上,这个量是一般情况,还要看你的产物长度,短的话可以少一些,长的话可能还要多送一些,供你参考。具体Z好咨询你要送测序的测序公司,这样即符合他们的要求就可以,同时也不会因为样品量的问题耽误你自己的实验进程。
  纯化的pcr产物测序需要的要求:
  (1)扩增产物必须特异性扩增,条带单一。如果扩增产物中存在非特异性扩增产物,一般难以得到好的测序结果;
  (2)必须进行胶回收纯化;
  (3)DNA纯度在1.6-2.0之间,浓度50ng/ul以上。

  方法
  (1) 在PCR反应液中加入3倍体积的Buffer PCR-A,若需加入的Buffer PCR-A不足100μl,则加入100μl。
  (2) 将DNA-prep Tube置于2-ml Microfuge Tube中,将步骤⑴中的混合液移入DNA-prep Tube中,5500rpm离心1min。
  (3) 弃滤液,将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中,加入500μl Buffer W1,5500rpm离心1min。
  (4) 弃滤液,将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube 中,加入700μl 已加无水乙醇的Buffer W2,5500rpm离心1min,以同样的方法再用700μl已加无水乙醇的BufferW2洗涤一次。
  (5) 弃滤液,将DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中,14000rpm离心1min。
  (6) 连滤液一并弃掉收集管,将DNA-prep Tube 置于一新的1.5ml 离心管中,在silica 膜ZY加入25-30μl Eluent或去离子水(65℃预热)。 (7) 室温静置2min,14000rpm离心1min洗脱DNA。 (8) 取5μl样品,1%琼脂糖凝胶电泳检测纯化结果。
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