做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?

499303088 2012-05-31 PCR管浏览 616 次

还有就就是，为什么要制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板？
这些步骤在实验中有什么作用？

精彩问答

chenxsong521 发布日期：2012-06-12

在做QRT-PCR时，一定要有内参，即在PCR时，每个标本都要做对应的内参，而且每次都是看家基因，一般用bate-actin，有时也用GAPDH。
内参的选择：普通PCR内参的大小没有多大要求，但real time一般选择300bp以下。
它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时，加入的浓度可能会不一致，即使用分光广度计测其浓度，也会有仪器误差，跑出的条带要进行灰度分析。用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量。
希望对你有所帮助。

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lily55215 发布日期：2012-06-01

标准反应体系里面有引物，dNTP，Taq酶，等PCR所必须的东西，所以必须有反应体系，引物有可能形成二聚体，在PCR 过程中即可看到，一般位于MARKERZ小带的上面（也就是说很小，是指引物之间互相配对儿），管家反应体系我不懂了……DNA模板梯度的设置时为了选取DNA模板Z合适的浓度，浓度过低可能得不到结果，浓度过高则特异性不强，杂带会多

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