请问人巨噬细胞的消化是用胰蛋白酶+EDTA，还是只用EDTA？

2嗨皮了 2011-01-01 螯合剂浏览 828 次

精彩问答

xinxin0106搜狐发布日期：2011-01-02

胰蛋白酶是切割蛋白质的，因为细胞与细胞之间存在着一些连接结构，主要成分是蛋白质，加入适量的胰蛋白酶可以将这些蛋白质降解，从而使得细胞之间彼此分散。EDTA为金属离子螯合剂，许多酶功能的发挥需要一些金属离子作为辅基起作用。EDTA通过螯合金属离子，从而使酶活性降低，以达到YZ反应的目的。所以，一般用酶消化蛋白质，需要EDTA来终止，以防止蛋白酶过度降解蛋白质（如细胞内部的蛋白质）。

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wxy7812 发布日期：2011-01-16

以我个人的经验，巨噬细胞由于其强附着力的原因，无论是EDTA-胰酶，还是单纯胰酶，消化的效果都不是很理想，建议采用ice-cold的PBS孵育1-2min，用移液器吹打消化即可。需要注意之处是由于巨噬细胞敏感，较容易被激活，且巨噬细胞的激活是不可逆的，因此孵育时间不能过长。

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gukjimf22390 发布日期：2011-01-02

你好!我认为您应该搞清楚胰蛋白酶和EDTA在消化过程中的作用。
消化的目的是去除细胞之间的连接，细胞之间会有蛋白类细胞外基质存在，从而使细胞之间相互连接在一起及一些蛋白类细胞外基质具有粘附作用，从而贴壁。胰蛋白酶就是作用于赖氨酸和精氨酸羧基断肽键，从而起到消化目的。
一些组织中需要Ca2+等起到维持组织完整性，而EDTA也就是乙二胺四乙酸可以与Ca2+结合，从而去除钙离子，使细胞分散。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%，以无钙、镁的平衡盐溶液配制。
实验室内常将胰蛋白酶和EDTA联合使用。可提高消化效率，细胞分散情况改善。
EDTA不能被血清YZ，所以消化后必须彻底清洗。EDTA对成纤维细胞作用差。
结合上面所述，你就可以进行判断！

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