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如何理解样品制备过程中蛋白质分离,提取和纯化?

Fo81eg8    2009-12-03    蛋白电泳    浏览 373 次

蛋白质样品的制备有哪些过程?各个过程的意义是什么?

精彩问答
灌水丶浇花 发布日期:2009-12-04
蛋白质样品的制备主要包括分离和纯化两大步骤。前者是从生物体中提取出蛋白质,后者是提纯某一种目标蛋白。

1 蛋白质带有电荷,是两性分子,因此能够在电场中运动,因此能够电泳。

2 双向电泳中的diyi向(等电聚焦)利用了蛋白质在不同pH值下带有不同的电荷,从而可以在等电聚焦中停止在蛋白分子不带电的pH值带上。而第二项(SDS-PAGE)则是利用不同大小的蛋白质在PAGE胶中泳动速率不同,即通过蛋白质分子量大小来区分。

3 聚丙烯凝胶电泳的基本原理是蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中,可因为自身大小缘故在凝胶的孔洞中运动,越大的蛋白受到的阻力越大,因此泳动越慢,从而分离蛋白。SDS的作用是变性蛋白,并中和电性,使得蛋白质的泳动速率只决定于其分子量大小。
全部评论
爱陷入你的温柔 发布日期:2009-12-04
一种分子放置在电场中,他就会以一定的速度移向适当的电极。所以呢,根据蛋白质分子的大小、构型、形状、所带净电荷,就可以通过电泳将其混合物种不同组分给分离开来。PAGE中因浓度不同会形成大小不等的孔隙,可以让不同的分子在电场作用下穿过其中。浓度不同,孔隙大小不同,能穿过的分子也不同,一定时间的电场作用下穿过的距离也不一样。

SDS是十二烷基硫酸钠,其是常用的蛋白质的变性剂,可以中和电性,使蛋白质的泳动速率只取决于分子的大小~
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