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有哪些实验用于检测中性粒细胞功能

望增要好人    2015-10-28    大肠杆菌检测    浏览 486 次

精彩问答
noobyyeee 发布日期:2015-10-29
  一、细胞运动功能的检测
  中性粒细胞的运动有随意运动和定向运动之分,可根据其细胞面积判 断中性粒细胞活动的强度。严重酒精中毒及某些肿瘤患者,其中性粒细胞 的随意运动明显减弱,甚至消失。中性粒细胞的定向运动表现为趋化运动, 测定方法大同小异,原理相同。
  (一)体内试验法(皮肤窗法)
  染色观察中性粒细胞聚集的开始时间、程度和形态变化。健康人白细 胞在皮窗处 2~3 h 开始聚集,细胞数达 50~100 个,6 小时可达 1 000 个 以上。初期以中性粒细胞为主,以后单核细胞逐渐增多。
  (二)体外试验法
  1.滤膜小室法(Boyden 小室法)
  用油镜检测细胞在透明滤膜内通过的距离,求其趋化单位。
  2.琼脂糖凝胶平板法
  将琼脂糖制成凝胶平板,在ZY孔加中性粒细胞悬液,两侧孔分别加 趋化因子或对照培养液。经 37℃温育 2~3 小时后,染色测量细胞运动的距 离,按下式计算移动指数。
  移动指数=趋化移动距离/随意移动距离

  二、吞噬和杀菌功能的检测
  (一)细胞内杀菌功能的检测
  将待检细胞悬液按一定比例混和,加活的白色念珠菌悬液,保温后加 美蓝溶液作活体染色,取样涂片镜检。如胞内白色念珠菌呈蓝色,表示已 被杀死。共计数 100~200 个细胞,按下式分别求其吞噬率和杀菌率。
  吞噬率(%)=(吞噬细菌的细胞数/计数的细胞数)×100%
  杀菌率(%)=(胞内含着染菌体的细胞数/计数的细胞数)×100%
  溶细胞法能更直接反映细胞杀菌情况。将待检中性粒细胞悬液与已经 新鲜人血清调理过的细菌(大肠杆菌或金黄色葡萄球菌)悬液按一定比例混 合,置 37℃,每隔一定时间取定量培养物,经稀释后接种固体平板培养基, 37℃培养 18 小时后,计算菌落数,按下式计算中性粒细胞的杀菌能力。
  杀菌率(%)=(1—(30、60、90min 的菌落数/0min 菌落数)×100%
  正常情况下,吞噬指数接近于 1,吞噬率 61%~64%。对大肠杆菌的 杀菌率大于 90%,对金黄色葡萄球菌的杀菌率大于 85%。
  (二)硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验
  本法用以检测中性粒细胞的胞内杀菌能力。由于细胞在杀菌过程中耗 能剧增,其耗氧量亦随之相应增加,细胞内磷酸己糖旁路代谢活力增强, 葡萄糖 6-磷酸酶氧化脱氢。此时加入 NBT 可接受所脱的氢,使原呈淡黄色 的 NBT 还原成点状或块状颗粒,并沉积于胞浆内。在显微镜下计数细胞内 有蓝色甲膳颗粒的中性粒细胞所占比例。正常参考值为 5%~10%。
  (三)化学发光测定法
  中性粒细胞在吞噬经调理的金黄色葡萄球菌过程中,出现呼吸爆发, 产生大量活性氧自由基(oxygen redicals),它们与细胞内杀菌作用密切 相关,同时又能产生微弱的发光现象。在反应体系中加_米诺能起增应, 使发光效率大为增强,可用化学发光仪测定。
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