琼脂平板稀释法的具体步骤

稀释操作：1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按10^1到10^6的顺序进行编号.2、用移液试管吸取1ml培养的菌夜，注入10^1倍稀释的试管中.用手指轻压移夜管上的橡皮，吹吸三次，使菌液与水充分混匀.3、从10^1倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入10^2倍稀释的试管中，重复第二步的混匀操作.以此类推，直到完成Z后一支试管的稀释.注意：移夜管需要经过灭菌.操作时，试管口和移夜管应在离火焰1~2cm处
涂布操作：1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中.2、取少量菌夜（不超过0.1ml）滴加到培养基表面.3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s.4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀.
注意：1.将涂布器末端浸在盛有体积分数为百分之七十的酒精的烧杯中.取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃.

琼脂稀释法是将不同剂量的KJ药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度KJ药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以YZ细菌生长的琼脂平板所含Z低药物浓度为MIC。本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1.培养基制备
使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
2.含药琼脂平板制备
根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的KJ药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。
3.接种物制备与接种
制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4.结果判断
将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以YZ细菌生长的Z低药物浓度为MIC。在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较YZ80%以上细菌生长的Z低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。

贴了一个，你再看看这个网站，参考参考

http://www.coocao.com/medicine/200807/1928.html