为研究土壤中细菌、真菌、放线菌的数目,我们利用选择培养基,以便在土壤水溶液中选出目的菌种,在用分浓度梯度法在选择培养基上培养出但菌落,以便计数。计数时可以根据不同菌种的不同形态学特征来分辨,如果出现与上述三种以外特性的菌种可以用革兰氏染色鉴别。
一、主要的实验药品与仪器
(1)实验药品:牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂;1mol/L NaOH, 1mol/L HCl, 可溶性淀粉 , KNO3 , K2HPO4, MgSO4 ,FeSO4,KH2PO4,葡萄糖
(2)实验仪器:试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸(pH 5.5—9.0),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。
二、实验方法
1、细菌分离:取土样1g,加入99ml无菌水中,震荡10min,制成10-2 土壤稀释液,再取0.5ml 10-2 土壤稀释液加入4.5ml无菌水中,制成10-3 土壤稀释液,以此类推··· ···。取10-5 ,10-6 ,10-7 土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中,涂平板,每个稀释度两个平板。在30度恒温培养箱中培养24h后观察结果。
2、放线菌分离:取土样1g,加入99ml无菌水中,震荡5min,制成10-2 土壤稀释液,再取0.5ml 10-2 土壤稀释液加入4.5ml无菌水中,制成10-3 土壤稀释液,以此类推··· ···。取10-3 ,10-4 ,10-5 土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中,涂平板,每个稀释度两个平板。在28度恒温培养箱中培养5~7d后观察结果。
3、霉菌分离:取土样5g,加入95ml无菌水中,震荡5min,制成10-2 土壤稀释液,再取0.5ml 10-2 土壤稀释液加入4.5ml无菌水中,制成10-3 土壤稀释液,以此类推··· ···。将以灭菌的培养基融化,加入链霉素溶液,但培养基凝固后,取10-2 ,10-3 ,10-4 土壤稀释液0.1ml加入相应编号培养基中,涂平板,每个稀释度两个平板。在28度恒温培养箱中培养3~5d后观察结果。
三、结果与讨论 当培养结束后,观察培养基上的菌落,由于本次试验的各种经济,效果,作用等等方面的原因,培养基并不能完全分离土壤中的各种菌类,例如,土壤中除了细菌,霉菌,放线菌外还有大量的杂菌,如:酵母菌、真菌、藻类等,微生物,如:各种寄生虫(卵)等,所以我们要根据细菌,放线菌,霉菌的宏观物理特性来分别。当进行显微观察时,霉菌不用染色,放线菌、细菌要进行简单的染色,然后再显微镜下观察菌体形态。