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如何提取胚胎RNA避免不必要的基因表达改变

punctual冷泛窝    2017-01-21    血液核酸提取    浏览 430 次

精彩问答
goolring 发布日期:2017-01-22
DNA(PCR)只能证明有这个基因,不能证明这个基因表达与否,只有RNA(RT-PCR)才能看出基因表达与否。二者排列组合可以出现3种情况:(1)DNA与RNA都阳性,说明有这个基因,并且目前表达。(2)DNA阳性,RNA阴性,说明有这个基因但目前不表达。(3)DNA阴性(不应写成“DNA表达阴性”)而RNA表达阳性,如果做的是哺乳动物组织标本应该是不会出现的。但其他标本可能不一定。如病毒就有分DNA病毒和RNA病毒。一般来说,看哺乳动物组织标本某种基因是否表达,应该提取RNA来做。
除以上讲的外。在研究遗传病时,DNA与RNA都做可以起到互相验证的作用。如分析一个病人某基因DNA,发现某个外显子中有一个碱基发生点突变,可以使蛋白质的氨基酸改变或者形成提前终止密码子等。可以再提取RNA,查查mRNA是不是有同样的结果。这里提示一下,人体RNA一般是没有内含子的。这在小基因不重要。如果是有很多外显子的大基因(很难用一个PCR扩出整个基因),查其中某个外显子DNA有没有突变,引物常设计在该外显子两端的内含子中。而查RNA时,引物是设计在该外显子两侧的外显子上,当然也可以在几个相连外显子片段的两侧甚至包含整个RNA,这样扩增片段就大一些。
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