列举两种研究基因表达模式的方法并简述其原理

1、经典的半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR。提取总RNA，通过光度计和电泳法检测质量并定量，采用反转录试剂盒进行反转录。对于半定量RT-PCR，采用内标基因（如25SRNA）引物对各样品进行普通PCR扩增和电泳，证明反转录成功，并通过调整加入的总cDNAdiyi链的量，使各样品间内标扩增条带亮度达到一致。然后以此总cDNAdiyi链的模板量进行目标基因的普通PCR扩增，电泳后通过条带有无和亮度强弱来比较各样品间（器官组织间、发育阶段间、诱导时间间等）目标基因表达的水平的差异性或变化动态。对于实时荧光定量RT-PCR，反转录完成后，通过内标基因或其它基因的扩增证明反转录成功，然后直接对内标基因和目标基因进行实时荧光定量PCR扩增，通过仪器自动检测Ct值来比较各样品间目标基因表达水平的差异性或动态变化。
2、芯片杂交法和SAGE法。将各样品的总RNA反转录得到的总cDNA进一步合成为双链总cDNA，用适当的酶切处理，得到小片段，然后与芯片杂交，电脑对不同样品间相同基因的杂交信号强度进行叠加处理，自动分析出各样品间各基因表达水平的表达差异性或变化动态。SAGE (serial analysis of gene expression)是基因表达系列分析，将各样品总cDNA采用适当酶切，得到短片段，然后互相连接成800bp左右的串联体，然后测序，然后采用电脑自动统计各基因被测序到的次数，以此表示各样品内各基因表达的丰度，然后比较各样品间各基因表达水平的差异性或动态变化。