DNA固相合成是咋回事？

上不上班888 2016-12-01 DNA合成仪浏览 366 次

精彩问答

十几年x 发布日期：2016-12-02

即DNA3'端固定于基质上，然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于应用DNA聚合酶的DNA合成。

合成过程
diyi个碱基的3‘末端固定在树脂上，下一个碱基的5’-OH用二对甲氧三苯甲基DMT保护，碱基上的氨基用苯甲酸保护，然后对3‘-OH用氨基磷酸化合物进行活化。
1。1个碱基的5’-OH和下个碱基的3‘-OH形成亚磷酸三酯，
2。然后用碘氧化成磷酸三酯
3。加入二除去第二个碱基5’-OH上的保护剂DMT
循环进行加入下一个碱基
合成完毕后
1。用苯硫酚除去5’-OH上的保护剂DMT
2。用浓氢氧化铵将片段与固体树脂断开，洗脱
3。用浓氢氧化铵在加热的条件下除去碱基上的保护剂
4。除去氢氧化铵，真空抽干
5。液相色谱或者PAGE，回收片段Z长的。

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