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如何减少蛋白质分离纯化中减少蛋白质变性的机会

刘海东10    2010-12-03    蛋白质纯化系统    浏览 1361 次

精彩问答
cuichaoqun92 发布日期:2010-12-04
蛋白质变性影响因素:
1,一般温度高于60摄氏度持续一段时间会变性。不同蛋白耐受高温不同,具体问题具体分析。
2,高浓度有机溶剂,如丙酮,,巯基乙醇等。
3,含有蛋白酶环境会分解蛋白。
4,变性剂,如高浓度盐酸胍和尿素。,
5,盐溶液,在一定浓度盐作用下,会使蛋白中折叠在内部的疏水集团暴露而改变折叠结构。
6,pH值变化,强酸强碱条件下会破坏蛋白质结构。等电点时蛋白质沉淀。
。。。
因此,克服和避开上述内容可以减少变性。具体措施:
1,控制温度,pH值。避开强酸强碱和等电点。
2,尽量减少和有机溶剂和变性剂的接触。
3,添加蛋白酶YZ剂,可以减少蛋白分解。
4,盐浓度适宜,不能太高。
5,增加NMSF,N-马来酰亚胺,去氧胆酸钠等抗氧化物质,可以防止蛋白被氧化变性。
。。。。
被采纳
yangshao327 发布日期:2017-12-16 09:09:52
不会的,PH稳定住了,温度稳定住了就好了,Z后的buffer一定要选好PH,盐浓度不要太高,加蛋白酶YZ剂,就可以了,在适当的环境下,变性的还会复性不是吗?!除非纯化过程中你用了β-ME之类的东东
全部评论
王国禄2 发布日期:2010-12-06
在分离纯化时,先要了解你蛋白质的性质,比如等电点
然后选择合适的PH(比如说IgG MAB 洗脱时适合ph为4-4.5),合适的盐离子浓度,合适的缓冲体系。另外你可以适当添加一些其他物质减少变性机会,比如山梨醇,蔗糖等。
一般如果说是过柱子的,那就推荐PH为3-5,盐离子浓度为0.1-0.5M,流速为0.3ml/min
具体的你多查一些文献看看
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