流式细胞仪 FITC-PI双染HEK293T细胞空白组细胞凋亡率很高

午夜啪啪么 2017-03-27 流式细胞仪浏览 375 次

求助，做了普通细胞的FITC-PI双染凋亡检测，FITC单标管阳性阴性细胞无法分开 Z后导致正常细胞样本早凋晚凋达到了60%+ 求问是我的电压补偿设置有问题还是操作有问题？会不会是FITC试剂染料的特异性太差或者浓度太高染上了正常细胞?

精彩问答

lczlcz601 发布日期：2017-03-28

做这个实验，有几个要求：
diyi，贴壁培养的细胞要处理的非常轻柔，不然会导致大量假阳性（Annexin V 阳性）。这个方法Z好是由于悬浮培养的，比如淋巴细胞
第二，从图上看，你的电压设置的过低，diyi个图阴性无染色的细胞都被压倒一起，而不是位于左下象限的中间。另外，你的阳性对照的细胞，用的是已知确定凋亡死亡的细胞吗？PI的染色看起来很弱
第三，Annexin V单染没有强阳性，而且这个细胞群都有右移，这个提示很可能是你处理细胞过头导致的假阳性。
第四，你没有贴FSC-SSC的图。真有凋亡发生，那个图也会有变化的。
第五，你的单染对照因为设置的电压过低，没有做对双色补偿，所以你这个实验数据时无效的。

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