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做流式细胞时候,制备细胞悬液加入荧光染料后,还要做什么处理么?

niaoshen000    2012-10-23    流式细胞仪    浏览 275 次

收集的荧光会不会包含有来自未结合于抗原的抗体?就是说会不会有游离的抗体,且激光激发标记于游离抗体上的荧光素?

精彩问答
萌新1824 发布日期:2012-10-24
染色后要洗细胞,将细胞洗干净,这步非常关键。游离的带荧光标记的抗体会附着在溶液的杂质中,还有细胞碎片上,所以不管你怎么洗,肯定还会有游离的抗体,但是如果做的好的话,少到可以忽略不计。针对你提出的问题,有两点是必须要做到的:1.Z后一步洗细胞要洗干净;2.要做阴性对照(作为本底的数值),即选一组不会和抗体发生特异结合反应的细胞,按照实验组一样做对照,加荧光抗体。在计算结果时候,用你的实验组的数值减去这个阴性对照组(空白、本底)的数值,就是Z终的值了。祝你好运!有不明白可以再问
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