双抗夹心ELISa的步骤是什么？

玉儿950 2011-12-25 酶标仪浏览 657 次

有的原理上说是（1）单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色。但是我看论文上都是（2）单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色。请问到底是什么？本人对双抗夹心ELISA不太懂。

精彩问答

hdpslin02 发布日期：2016-12-01

（1）单抗包被-抗原-酶标二抗-底物显色。
本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。
（2）单抗包被-抗原-二抗-酶标二抗-底物显色。(改良双抗体夹心法)
本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体，经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b，而这次加入的抗体b于diyi次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的，但不是用同种动物免疫制备的，否则可出现非特异性反应。经孵育洗涤后，再加酶标记抗b抗体，再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。因此，放大的倍数更高，故比双抗体夹心法更加灵敏。同时避免标记特异性抗体，而另一优点是只要标记一种抗抗体，即可达到多种应用。

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shankenoc919 发布日期：2011-12-26

代那

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囍碍你ie 发布日期：2011-12-26

你说的是双抗体夹心法吧！它是用来测抗原的！例如测乙肝病毒的表面抗原，如果阳性可以说明得乙肝了！步骤： 1.平衡20min（把需要的东西准备好，保证实验

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梦梦19999 发布日期：2011-12-26

双抗体夹心的意思是包被抗体-检测抗原-酶标抗体形成夹心结构。
至于是单抗或者多抗都可以。
如果是酶标二抗（二抗就是抗抗体）的话，一般是包被抗原-抗体-酶标二抗，这种是间接法的

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