酶联免疫或化学发光免疫分析的对象包括有酶、蛋白、抗体、多肽、抗原、核酸、糖、脂质等物质,其中酶、蛋白、抗体或多肽均属于蛋白类分子,需要使用蛋白缓冲液来保护蛋白。
1. 生物缓冲液,包括有Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、PB磷酸缓冲液、CB碳酸缓冲液等,其中Tris的缓冲体系应用较为普遍,缓冲能力比较强,同时对蛋白有良好的溶解性,为蛋白提供合适的pH环境。
2. 盐类,主要是氯化钠,调节蛋白缓冲液的离子强度(类似盐浓度)。通常配制时,需较少的离子强度防止蛋白沉淀;但需要将蛋白脱离出来时,应增加离子强度,否则蛋白难以沉淀脱离完全。对于有些蛋白,两性离子的盐类有助于蛋白结合。
3. 表面活性剂:吐温20、Triton X-100等,改变缓冲溶液表面张力,增加试剂相容性。
4. 有时还需要添加糖类如蔗糖、海藻糖等,惰性蛋白如Casein(酪蛋白),防腐剂如叠氮钠、卡松(异噻唑啉酮混合物)等。
蛋白缓冲液选择优化
虽然蛋白缓冲液的基本组成类似,不过没有通用的缓冲液,不同的系统必须分别优化。不同的蛋白其合适的pH值、亲水性、溶解性、稳定性都有差异。另外,蛋白在缓冲液中越不稳定,蛋白结合力越强。当缓冲液pH与蛋白等电点相同时,蛋白最不稳定,容易聚集沉淀。
蛋白缓冲液的稳定作用
蛋白缓冲液中添加有糖,对包被蛋白的稳定性有重要作用,减缓蛋白老化作用,并增加亲水性;添加的表面活性剂也是增加蛋白的亲水性,惰性蛋白也具有保护作用。在蛋白结合包被步骤中,需用沉淀剂(醇)降低蛋白的稳定性,也可润湿膜,减少膜带有的静电。
这里的蛋白在缓冲液中的稳定与不稳定是特定的,改变缓冲液的部分条件以优化不同的蛋白处理步骤,前提都是不能使蛋白变性或失活。德晟是生物缓冲剂厂家,生产有Tris、Bicine、MOPS等多种缓冲剂。
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