根据《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册(试行第二版)》通知,“人群筛查应选择具有病毒灭活功能,如含胍盐(异硫氰酸胍或盐酸胍等)或表面活性剂的采样管。”
灭活型病毒采样管可高效灭活病毒,保护病毒核酸不被降解,且能在常温下保存较长时间,为样品保存及运输节省成本。选择灭活效果好的病毒采样管,有助于确保后续核酸检测质量。
本期实验,我们选取逗邦®一次性使用病毒采样管进行灭活效果测试,过程如下:
✓
实验材料
病毒采样管:
逗邦®一次性使用病毒采样管(灭活型)
实验材料:
慢病毒(吉凯基因,GCNL0319432),HEK293T细胞
核酸提取试剂盒和提取仪:
逗邦®(BNP027-2B, M32)
新冠荧光PCR试剂盒:
圣湘(N083-5X0001)
逗邦®一次性使用病毒采样管(灭活型)
✓
实验方法
参考《消毒技术规范》(2002版)病毒灭活试验中描述的检测方法,确定病毒保存管灭活能力。
步骤一:细胞培养
将生长状态良好的HEK293T细胞消化计数后稀释至1×104/mL,按照100μL/孔的体积,每个梯度的病毒做三个复孔,计算所需接种孔数,将细胞缓慢均匀接种至96孔板中。放入37℃,5%CO2培养箱中培养过夜。
步骤二:慢病毒稀释
将病毒滴度为107-108TU/mL的慢病毒按10倍梯度进行稀释,连续稀释3个梯度。
步骤三:病毒灭活
把稀释好的病毒置于室温条件下,与灭活款病毒保存液(批号:220201/220207/220211)按1:1体积比进行混合,置于室温下分别放置1min、5min和10 min进行灭活。
步骤四:终止灭活
采用病毒分离培养基(可用DMEM完全培养基替代)进行1000倍稀释以中和灭活保存液,终止灭活。
阴性对照:为病毒分离培养基对灭活款病毒保存液稀释1000倍的混合液;
阳性对照:为病毒分离培养基对病毒原液稀释1000倍的混合液。
步骤五:病毒孵育
将事先培养的HEK293T细胞中吸弃细胞培养基,每孔加入100μL准备好的病毒混合液,和对应的阳性对照、阴性对照。病毒孵育3小时,每隔30分钟从培养箱中取出晃动一次。
步骤六:细胞培养
孵育结束后,将病毒液吸去,每孔中加入100μL DMEM完全培养基,将96孔板置于37℃,5% CO2培养箱中培养,并观察细胞状态。
步骤七:荧光细胞观察与计数
继续培养48-72h,期间观察细胞状态,若细胞培养液变黄,应换液,对荧光细胞个数适量的孔进行计数,计算病毒滴度。
✓
实验结果
图1:三批次灭活款病毒保存管在病毒灭活
不同时间后细胞生长情况
表1:三批次灭活款病毒保存管在病毒灭活
不同时间后病毒滴度情况
✓
实验结论
由图1和表1数据可以看出,慢病毒经灭活1min、5min和10min后感染HEK293T细胞后,在显微镜明场下细胞生长正常;三批次的灭活款病毒保存管与病毒作用5min后,可以有效灭活病毒。
近期国内新冠疫情频发,防控形势严峻。新冠病毒核酸检测质量对于疫情防控具有重要作用。目前病毒采样管仅需I类医疗
今年的春节,我们要从一只蝙蝠,哦不,是从一种病毒说起~(一)
如题:崂应烟气预处理器1080D1.5米长的采样管跟0.8米的采样管加热时间一样长吗?... 如题:崂
2ml/5ml/10ml病毒采样管/冻存管/保存管无菌 带螺旋盖微量样品管/离心本生生物公司供应:elisa试
一次性使用病毒采样管/微生物采样无菌管 病毒采样管/进口冻存管/储存管1.5ml 2.0ml本生(天津)健康科技
当核酸检测样本进入实验室后,检测对核酸检测员是个大考验。检测流程繁琐,影响因素众多,绝不是
通过长期性能验证,我司产品“一次性使用病毒采样管”的有效期变更为18个月。特此声明 。
样品管、采样管智能(自动)开关盖仪器,减轻医护人员双手工作负担。样品管智能(自动)开关盖仪功能:1: 实验人员
尺寸说明:包装方式:产品特点New更高效节省将采集自20人的20支拭子集合于1个病毒采样管中进行核酸检测,可
为落实国务院应对新冠病毒感染肺炎疫情联防联控机制《关于做好新冠肺炎疫情常态化防控工作的指导意见》以及《关于加