天然疏水相互作用色谱与多角度光散射联用优化大肠杆菌全长SARS-CoV-2核衣壳蛋白的制备

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天然疏水相互作用色谱与多角度光散射联用优化大肠杆菌全长SARS-CoV-2核衣壳蛋白的制备

严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的核衣壳蛋白（NP）在病毒生命周期的几个阶段中具有重要作用，并且在感染过程得到大量表达，使其成为诊断过程中理想的靶蛋白。该蛋白质具有强烈的二聚化以及与核酸相互作用的趋势。

细胞匀浆通过核酸酶处理和一系列下游处理 (DSP) 步骤获得纯化。天然疏水相互作用色谱法与多角度光散射检测（HIC-MALS）联用的分析方法可以监测整个纯化过程中样本的碎片化和多聚化。优化后的工艺可以让每升样本发酵生产730mg纯化的NP，相当于细胞裂解产率的77%。HIC-MALS方法证明了NP 产品的生产纯度可以达到 95%。通过尺寸排阻与多角度激光光散射检测技术联用（SEC-MALS）系统分析进一步证实NP主要部分的分子量与二聚蛋白一致。肽图质谱和宿主细胞特异性酶联免疫吸附测定证实了产品的纯度，残留杂质为少量内源性物质。优化后的HIC-MALS方法可以监测产品纯度，同时获取其分子量，并提供与已有的SEC-MALS分析方法互补的正交信息。通过扩展变量来调整HIC模式中的选择性，可以在SEC上实现更高的分辨率。