AAV (腺相关病毒)正迅速成为基因治 疗的首 选方法。对这些关键疗法的准确表征,在确保生产质量及患者安全方面事关重大。对实心颗粒、空心颗粒及不完全组装颗粒比例的审查尤为严格。AUC 作为空壳率检测的金标准,能提供远高于其他技术的检测精度。
利用 AUC 进行AAV分析
高分辨率 AAV 分析需求
众所周知,AAV 颗粒的遗传负荷具有可变性,只有含完整基因插入序列的颗粒才能获得预期功能。因此,对 AAV 进行纯化,只分离出实心颗粒至关重要。此外,对功能性(实心)及非功能性(空心/部分实心)颗粒比例进行表征,是优化细胞培养效率、了解生产一致性、确定剂量及确保患者安全的关键。
AUC:采用独特表征技术
分析型超速离心机(AUC)采用超速离心分离不同颗粒,并且使用光学检测器进行辅助检测。经 AUC 分析后的颗粒通常按不同沉降系数(S)分离 —— 沉降系数影响因素包括颗粒大小、质量、形状和密度。由于不同质量、密度的 AAV 颗粒其装载量也不同,而 AUC 擅长将溶液中的这些颗粒进行分离,并提供高分辨率分析数据,无需基质相互作用,检测结果更加可信。
AUC 提供分辨率更高的数据
AUC 已成为定量评价 AAV 颗粒质量及完整度的金标准。例如,相较于阴离子交换色谱(AEX),AUC 分辨率更高,可清晰鉴别颗粒,而 AEX 则表现逊色。这些高分辨率AUC分析结果不仅适用于最 终产品质量控制,对优化细胞培养方法提高实心颗粒产出率同样行之有效。
Analysis of empty (E), full (F), and partially-full (P) AAV particles with aggregates (X) via AEX (A) and AUC (B). Reproduced with permission from Wang et al.†
采用 AEX(A)及 AUC(B)分析空心(E)、实心(F)和部分实心(P)AAV 颗粒及聚集体(X)。
小结
AUC 可提供高分辨率 AAV 样品分析信息,可实现定量鉴别空心、实心、部分包装颗粒及聚集体并检测其含量。
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