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1、提取

(1)将20mL牛奶和20mL Mcllvaine缓冲液加入50mL塑料离心管中；

(2)将样品涡旋混合2 min，4000 rpm以上离心10 min；

(3)取20mL上清液，待净化。

注:Mcllvaine 缓冲液(pH 4) / 称取磷酸氢二钠(Na2HPO4?12H2O)27.6g、柠檬酸(C6H8O7?H2O) 12.9 g、乙二胺四乙酸二钠盐37.2 g，用水溶解后稀释并定容至1000 mL。

2、净化

ProElut PLS 150mg/6mL（Cat.#68004）

(1)活 化：依次加入5mL甲醇，5mL水，流出液弃去。

(2)上 样：将20mL提取液加入柱中，流出液弃去。

(3)淋 洗：依次用5mL水，5mL5%的甲醇水溶液淋洗，流出液弃去，然后将PLS柱抽干。

(4)洗 脱：5mL甲醇洗脱，流出液收集。

(5)重新溶解：*将洗脱液在40℃减压浓缩至近干，然后用流动相重新定容至1mL。

注：由于上清液的量大于柱管体积，应分次上样，或在PLS 柱上加20 mL 储液管(Cat.#4811)，适配器(Cat.#4803)

流 速： 1.0 mL/min

检测器： UV 365 nm

柱 温： 30 ℃

进样量： 20 μL

流动相A： 0.01mol/L草酸水溶液 流动相B： 乙腈:甲醇1:1 梯度程序 时间0-10.01min 流动相B从30%到50%；10.01~10.5min 流动相B从50%到30%；10.5~20min流动相B为30%。

适用于牛奶中四环素类药物的测定。

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