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1、样品准备

 将15 mL 牛奶( 或3 g 奶粉、15 mL 水) 与15 mL 乙腈加入塑料离心管，涡旋混合2 min，6000rpm 下离心5 min ；

 取20 mL 上清液于另一离心管，加入15 mL 正己烷，涡旋混合2 min，6000 rpm下离心2 min，弃去正己烷，加入15 mL 正己烷重复操作一次；

 向下层清液中加入15 mL 乙酸乙酯，涡旋混合2 min，6000 rpm 下离心2 min，收集上层清液；

15 mL 乙酸乙酯重复提取一次，合并上清液。

将乙酸乙酯提取液在30 oC 下减压蒸馏至近干，用6 mL 30% 甲醇水溶液分两次溶解残渣，待净化。

2、净化 ProElut PLS 60 mg/3 mL (Cat.#68003) 

a 活化： 3 mL 甲醇活化、3 mL 水平衡；

b 上样： 将待净化液加入小柱，流出液弃去；

c 淋洗： 3 mL 30% 甲醇水溶液淋洗，淋洗液弃去，然后将小柱抽干；

d 洗脱： 3 mL 甲醇洗脱，收集洗脱液；

e 重新溶解：30oC 下将洗脱液减压蒸馏至近干，1 mL 流动相溶解，微孔滤膜过滤后供HPLC 分析

注：e 步骤是供参考的，使用者可根据自己使用的分析仪器进行调整。

流速：1 mL/min

进样量：20 μL

检测器：UV 280 nm

柱温：30 oC

流动相：甲醇/ 水=50/50 注：本方法中，目标化合物是由HPLC 测定的，但这并不表明其他仪器不适合。

当使用者采用其他方式进行检测时，同样可以采用本方法进行样品前处理。

适用于奶和奶粉中氯霉素的检测。

1 氯霉素