人Endorphin-定量EIA试剂盒使用说明说明书
- 上传人: 上海科学仪器有限公司 |大小:41.5KB|浏览:310次|时间:1970-01-01
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人Endorphin-b定量EIA试剂盒使用说明原理本实验采用双抗体夹心ELISA法。用抗人Endorphin-b单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的Endorphin-b与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB,出现蓝色,加终止液,颜色变黄,在450nm处测OD值,Endorphin-b浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中Endorphin-b浓度。试剂盒组成(2-8℃保存)酶标板(CoatedWells)96孔酶标抗体工作液(EnzymeConjugate)6ml10×标本稀释液(SampleBuffer)12ml20×浓缩洗涤液(WashBuffer)50ml标准品(Standards):6瓶一套底物工作液(TMBSolution)12ml封板纸一张终止液(StopSolution)12ml准备试剂与收集血样1.收集标本:血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融。2.标准品**次使用时用0.5ml的蒸馏水溶解,放置半小时混匀后使用,用后放在-20oC保存。溶解后浓度分别为35、20、8、4、2、0ng/ml。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)检测程序1.建立标准曲线:设标准孔6孔,每孔各加入标准品50ul。2.加样:待测品孔每孔各加入待测样品50ul。3.每孔加酶标抗体工作液50ul。将反应板置37℃反应120分钟。4.洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。5.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗处反应15分钟。6.每孔加入100ul终止液混匀。7.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品35、20、8、4、2、0ng/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应Endorphin-b含量。试剂盒性能1.灵敏度:Z小的Endorphin-b检测浓度小于1ng/ml。2.特异性:可同时检测重组或天然的人Endorphin-b。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性:板内、板见变异系数均小于10%。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!
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