豚鼠肿瘤坏死因子α试剂盒使用说明书下载
- 上传人: 研域(上海)化学试剂有限公司 |大小:10.5KB|浏览:332次|时间:2018-09-19
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TNF-Α试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知TNF-Α浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TNF-Α和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TNF-Α的浓度呈比例关系。1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。5、保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。ELISA试剂盒操作注意事项:1,试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。2,实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。3,不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4,使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。5,使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6,底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。8,加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。9,按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。豚鼠肿瘤坏死因子α试剂盒操作步骤:1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
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