肾上腺皮质抗体（ACA）ELISA试剂盒实验需求

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肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒需要的器材（1）聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，人ELISA试剂盒ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。（2）小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。（3）4℃冰箱，37℃孵育箱。肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒需要的试剂（1）包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:NaHCO31.59克NaHCO32.93克加蒸馏水至1000ml（2）洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15MKH2PO40.2克Na2HPO412H2O2.9克NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸馏水至1000ml（3）稀释液：牛血清白蛋白（BSA）0.1克人ELISA试剂盒加洗涤缓冲液至100ml或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。（4）终止液（2MH2SO4）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98%）21.7ml。（5）底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml0.1M柠檬酸（19.2克/L）24.3ml加蒸馏水50ml。（6）TMB（四甲基联苯胺）使用液:TMB（10mg/5ml无水乙醇）0.5ml底物缓冲液（PH5.5）10ml0.75%H2O232μl（7）ABTS使用液:ABTS0.5mg底物缓冲液（PH5.5）1ml3%H2O22μl（8）抗原、抗体和酶标记抗体。（9）正常人血清和阳性对照血清。肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒的包被：包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置一夜，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的Z适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒的封闭：封闭（blocking）是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。Z常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，其Zda的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用，但由于奶粉的成份复杂，而且封闭后的载体不易长期保存，因此在试剂盒的制备中较少应用。
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