ELISA法在梅毒检测中的临床意义
- 上传人: 上海盈公生物技术有限公司 |大小:11.29KB|浏览:994次|时间:2018-09-27
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梅毒是一种性传播疾病,近几年来在我国的发病率呈明显的上升趋势。当前我国实验室诊断梅毒常用TRUST或快速血浆反应素试验(RPR)筛选后再用TPPA或螺旋体血球凝集试验(TPHA)等确证。前类试验有较高的生物学假阴性和假阳性,后类试验则成本高、不能自动化、结果判断受主观影响。重组抗原ELISA是近年发展检测梅毒的方法,具有敏感性高、特异性好、自动化程度高、易于标准化等优点,本实验研究应用其对临床检测进行评价,现报告如下。1材料和方法 1.1.1临床标本均来自广东惠州市ZX人民医院,包括性病门诊124例梅毒血清,其中24例为一期梅毒、28例为早期潜伏梅毒、72例为二期梅毒,各期梅毒的诊断按标准方法进行[2]。59例门诊病人(其中19例类风湿关节炎、40例慢性乙型肝炎),172例献血员血清由血站提供。1.1.2试剂TRUST试剂盒(上海诺泰ZG生物技术有限公司);TPPA试剂盒(美国诺泰生物技术有限公司);重组抗原ELISA试剂盒(双抗原夹心)(上海伊丽萨生物科技有限公司)。1.1.3方法所有血清TRUST试剂盒、重组抗原ELISA试剂盒、TPPA试剂盒。试剂盒操作均在有效期之内,严格按说明书进行。TRUST和TPPA目测观察结果;ELISA结果用酶标仪测光密度(OD值),以cutoff值为界判断结果。2结果 3种血清学方法检测355份血清白标本的结果得知,ELISA和TPPA均为阳性的24例一期梅毒和28例早期潜伏梅毒中,TRUST分别为4例和3例阴性,而ELISA和TPPA均为阴性的类风湿患者的TRUST有4例为假阳性。TRUST和ELISA的敏感性、特异性分为92.7%(115/124)、98.3%(227/231)和1**%(124/124)、99.1%(229/231)。TRUST与TPPA的符合率为96.3%(342/355)。ELISA与TPPA的符合率为99.4%(353/355)。3讨论梅毒(Syphilis)是由苍白螺旋体(TreponemaPallidum,TP)所引起的一种严重危害人类健康的性传播疾病,近年来在我国有逐年上升趋势。选择好的检测方法,可以有效的尽快对梅毒进行ZL和预防。在我国当前大多数单位仍然采用检测非特异性抗体(如TRUST、RPR)作为梅毒初筛,阳性者再用检测特异性抗体(如TPPA、TPHA)作确诊。非特异性的检测试剂成本低、操作简便,结果易读,常用于梅毒的初筛,但其检测的是非特异性的抗心磷脂抗体,易受许多因素的影响,对于其他一些非梅毒者如红斑狼疮、类风湿自身免疫性疾病、孕妇等易产生生物学假阳性,及人工假阳性[1],特异性低。在本研究中,有4例TRUST为阳性的标本经TPPA确定为假阳性;此外,抗心磷脂抗体在梅毒的非活动期和ZL后易消失,对隐性梅毒早期或晚期梅毒和ZL后梅毒的敏感性低[2],造成假阴性而漏诊,本研究中一期、隐性梅毒共有8例TRUST阴性而TPPA为阳性,表明单靠检测非特异性抗体来筛查梅毒易造成漏检,给健康人群带来潜在的危害,应引起检测单位的足够重视。TPPA采用梅毒螺旋体天然抗原作为诊断抗原,有很高的特异性,采用间接凝集反应的原理,敏感性高,作为确证试验在世界许多国家被广泛使用,但梅毒螺旋体至今不能体外人工培养,抗原来源困难,因而TPPA试剂盒成本高,此外,TPPA测定包括多次吸液过程,会造成操作者出错的风险[3],还有该方法结果都依赖于操作者肉眼来判断和解释,结果不易保存。并且,先初筛再进行确诊操作烦琐。近年来,随着梅毒螺旋体全基因序列的解析,通过基因工程途径生产重组蛋白抗原或多肽作为抗原,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)将TP重组抗原包被在微孔测定板上,使试剂盒成本大大降低,重组抗原特异性高、纯度高,多种重组抗原联合使用可得到更高的敏感性和特异性,结合ELISA双抗原夹心法,使重组抗原双抗体夹心法ELISA试剂盒具有高度特异、灵敏、能自动化、标准化等优点,尤其适用于大样本的测定。本实验中,在总共355份标本中,ELISA假阳性仅2份,无漏检,以TPPA结果为参照,ELISA的敏感性、特异性为1**%、99.1%,表明ELISA与TPPA有良好的相关性;而TRUST的敏感性、特异性为92.7%、98.3%,ELISA敏感性和特异性均高于TRUST。国内外的研究也表明,梅毒-ELISA是目前检测梅毒的一种良好方法。 总之,双抗原夹心ELISA法具有敏感性高,特异性好,能自动化,判断结果客观准确,成本低,操作简便等优点,是一种集筛查和确诊为一体的检测梅毒的好方法,应该在临床检测方面进行推广,普遍使用。【参考文献】 [1]叶应抚.全国临床检测操作规程[M].第2版.南京:东南大学出版社,1997,432. [2]杨文林,杨健,刘丹莹,等.早期梅毒ZL前后血清学分析[J].临床皮肤科杂志,1998,27(5):314.[3]龚匡隆.梅毒血清学试验的内部质量控制[J].ZG皮肤性病学杂志,1997,11(1):31.阅读延伸:ELISA法与TRUST法在梅毒检测中的比较梅毒是一种广泛流行的性病,近年来在ZG发病率又有所回升。梅毒螺旋体(TreponemaPallidun)是梅毒的病原体,因其透明,不易着色,故又称苍白螺旋体。检测梅毒螺旋体的方法有快速血浆反应素卡片试验(RPR)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)。RPR法和TRUST法为非特异性血清试验,敏感性及特异性较差,肉眼判断结果易受检测者的主观性影响,易出现漏检和误判。下面采用梅毒螺旋体酶联免疫试验(TP-ELISA)与TRUST法进行比较,实验过程和结果报告如下
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