组织乙酰辅酶A羧化酶活性光度法定量 检测试剂盒产品说明书

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主要用途组织乙酰辅酶A羧化酶（ACETYL-COACARBOXYLASE）活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过底物乙酰辅酶A和碳酸氢盐受到乙酰辅酶A羧化酶的催化反应后，进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统，测定产生ADP过程中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反应，即采用光度法测定其氧化后峰值的变化，以分析组织裂解样品中乙酰辅酶A羧化酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中乙酰辅酶A羧化酶活性的定量检测，以及YZ剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。技术背景乙酰辅酶A羧化酶（AcetylCoACarboxylase；ACC；EC6.4.1.2），又称为乙酰辅酶A碳酸氢盐连接酶（AcetylCoA：bicarbonateligase-ATP），是ATP依赖性含生物素酶，参与脂肪酸生物合成。哺乳动物乙酰辅酶A羧化酶单体分子量为225－250Kd，含有许多磷酸化位点，以及1个生物素辅基位点、2个催化位点和1个异构（allosteric）位点。乙酰辅酶A羧化酶催化生物素辅基（prostheticgroup）的羧基化反应，然后将生物素上的羧基转移到辅酶A上，产生丙二酰辅酶A（malonylCoA），成为长链脂肪酸合成前的关键步骤。AMP活化蛋白激酶（AMP-ActivatedKinase；AMPK）调节该酶的活性，而十四烷基氧糠酸（5-(tetradecyloxy)-2-furoicacid；TOFA）YZ该酶的活性。基于底物乙酰辅酶A（acetylCoA）和碳酸氢盐，在ATP的存在下，受到乙酰辅酶A羧化酶的催化，获得产物丙二酰辅酶A和ADP，进而通过丙酮酸激酶（pyruvatekinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidizednicotinamideadeninedinucleotide；NAD），其吸光峰值的变化（340nm），来定量分析乙酰辅酶A羧化酶的活性。其反应方式为：AcetylCoACarboxylaseAcetylCo-A+ATP+HCO3→MalonylCoA+ADP+PipyruvatekinasePhosphoenolpyruvate+ADP→pyruvate+ATPlactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+（高吸收峰）（低吸收峰）产品内容清理液（ReagentA）60毫升裂解液（ReagentB）10毫升缓冲液（ReagentC）20毫升酶促液（ReagentD）2毫升反应液（ReagentE）2毫升底物液（ReagentF）2毫升阴性液（ReagentG）500微升产品说明书1份保存方式保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品保存的容器15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器DOUNCE匀浆器：用于裂解组织（微型）台式离心机：用于样品预处理1厘米光径比色皿或96孔板：用于光度分析操作的容器分光光度仪或酶标仪：用于样品光度分析
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