牛奶中β-内酰胺酶检测法
- 上传人: 上海科学仪器有限公司 |大小:29KB|浏览:2291次|时间:2018-08-14
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“无抗奶”,顾名思义,即不含抗生素的牛奶。早在2002年,这一概念便被提出,“无抗生素”的字样也登上了乳品包装。为何牛奶含抗生素?牛奶中的抗生素来自乳牛,乳牛被注射抗生素,主要是ZL乳腺发炎。乳腺炎是奶牛常见病,抗生素的使用是业内“公开的秘密”。牛奶中的抗生素可能导致饮用者过敏,或因长期接触抗生素而耐药。如何做到“无抗”? 药品合理间隔期后才挤奶,可以生产无抗奶,可以通过检验抗生素的方式验证。1、间接法方法原理:利用β-内酰胺酶能够酶解青霉素的原理,向牛奶中添加一定量的青霉素,如果牛奶中存在一定浓度的β-内酰胺酶,那么青霉素经β-内酰胺酶酶解后浓度会减少,从而判断牛奶中是否存在β-内酰胺酶。实验步骤:称取20g试样,在4℃、16000rpm条件下离心10min。取下层清液10g于50mL塑料离心管,并将塑料离心管置于37℃水浴锅中振荡孵育30min。向孵育后的离心管中加入无水乙醇15mL。振荡提取30min后离心,将上层清液过滤纸后收集于梨形瓶中。减压浓缩蒸发掉乙醇。向旋蒸后的梨形瓶中加入10mL磷酸盐缓冲液(pH=8.5),涡旋1min后调节pH为8.5。以1mL/min的速度将提取液通过经过预处理的OasisHLB固相萃取柱,用2mL磷酸缓冲液(pH=8.5)淋洗萃取柱,再用2mL水淋洗。Z后用3mL乙腈洗脱。将洗脱液在40℃下氮气吹干,用0.025M磷酸盐缓冲液(pH=7.0)定容残渣至1mL,待上机测定。色谱条件:LabAlliancePC-2000GX液相色谱配2000型紫外检测器;lanbo色谱柱:C18(4.6mm×150mm×5μm);流动相:甲醇/0.004M磷酸二氢钾(pH=4.5)=40/60;检测波长:268nm2、直接法方法原理:牛乳中的青霉素钾在β-内酰胺酶的作用下,主要生成青霉噻唑酸钾,并伴随生成少量的青霉胺、青霉醛等物质。经去脂肪、蛋白等前处理后,可以将青霉噻唑酸钾提取出来,经GX液相色谱仪检测确认其是否存在,从而判定该牛乳是否为人造“无抗奶”。实验步骤:称取20g试样,在4℃、16000rpm条件下离心10min。取下层清液10g于50mL塑料离心管,加入无水乙醇15mL,振荡提取30min后离心,取清液经0.45μm的滤膜过滤,用GX液相色谱仪检测。标准溶液配制:称取0.01g(极ng确至0.001g)青霉素钾于100ml容量瓶中,加入1ml市售抗生素分解剂,室温放置2h使青霉素钾酶解完全后用去离子水定容,得到青霉噻唑酸钾标准溶液,浓度100μg/mL。根据实际情况稀释后使用。色谱条件:LabAlliancePC-2000GX液相色谱配2000型紫外检测器;lanbo色谱柱:C18(4.6mm×150mm×5μm);流动相:甲醇/0.004M磷酸二氢钾(pH=4.5)=40/60;检测波长:230nm
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