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2024-05-08 17:31发布了技术文章
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2024-04-10 11:14发布了技术文章
2023-10-11 11:03发布了技术文章
2023-07-31 10:20发布了问答
随着经济进程的加快，动物及动物产品的流通越来越频繁，动物疫病的传播媒介不断增多，发病和病害流行的几率显著增加，在造成经济损失的同时，也严重危害了人类的健康和生命安全。对动物疫病有深入的了解并有及时有效的防控措施就显得尤为重要。
什么是动物疫病?
动物疫病是由某种特定病原体引起的，包括有致病性的细菌、病毒、真菌、螺旋体、霉形体、衣原体、立克次氏体、放线菌等微生物感染动物而引起的传染病和有病原性蠕虫、原虫、节肢动物感染或侵袭动物而引起的寄生虫病。
动物疫病检测的重要性
开展动物疫病检测，有利于及时明确动物病因及根源所在，降低疫病发生率，提高治疗效果，促进养殖业可持续发展。可以对动物疫病起到预防作用，真正准确分析当前动物疫病的流行特征及其可能对周边造成的危害。提高动物产品质量，使人们的食品安全得到尽可能的保障。
动物疫病检测的方法
现阶段主流的动物疫病检测方法主要有传统检测、血清学检测和核酸检测。核酸检测作为动物疫病检测中常用的方法之一，具有实验周期短、灵敏度高、特异性强、实时定量等优势。常见动物疫病病原核酸检测方法及依据标准如下：
盘古Super8全力守护动物健康
盘古 Super 8，使用通用耗材20min可得到结果，以它的快速、便携、简单、免校准和多机连用等优点全方位助力动物疫病检测。
盘古 Super 8搭配Apexbio非洲猪瘟快速提取试剂盒和荧光定量PCR酶预混液，从快速核酸提取到出检测结果，一站式解决，简单方便快速。
2023-07-31 10:20发布了技术文章
2023-07-10 11:24发布了问答
检测不及时？发现的时候已经开始死亡？动物死亡率高？你是否还在为动物疫病造成的经济损失而苦恼。究其原因是我们没有及时发现问题，提前采取措施。
那么都有什么检测方式可供我们选择呢，下面一图带你了解现阶段主流的动物疫病检测方法。
目前整个畜牧行业使用较多的还是传统检测和血清学检测，诊断路径为：
这就大大延长了疾病窗口期，随着疾病临床表现越来越复杂，特征越来越不明显，临床诊断很容易误判，导致治疗不及时，动物发病大量死亡。
那么基因检测具有其独特的优势，其一是检测速度快，其二是受环境条件的限制较小。但目前多在实验室进行检测，没有发挥出第二条优势，仍会耽误最佳治疗时间。
针对这一痛点，Pangaea Super 8（速8）超快速荧光定量PCR系统可以进行现场快速检测，最快20分钟完成诊断，直接用药，极大的缩短了窗口期，及时用药治疗，减少死亡。
针对动物疫病的检测，艾普拜公司提供全流程解决方案，从快速核酸提取到出检测结果，一站式解决，欢迎感兴趣的您前来咨询。
2023-07-10 11:24发布了技术文章
2023-07-04 10:23发布了行业资讯
2023-06-27 16:26发布了技术文章
2023-06-13 10:33发布了问答
导读：
对于小编来说，每次做核酸检测都是一个漫长的过程，从样本处理到核酸提取，感觉大半天就过去了，接着跑一板qPCR就是两个小时，勤勤恳恳一天下来也没做多少，不仅人困马乏，实验进度也迟迟跟不上老板的“催命”进度。此处省略一万字。。。。。。
从图中我们也能发现，除了qPCR的时间较长之外，大部分时间都花在了核酸提取过程中，那么如何从流程中的各环节去节约时间，同时保证结果的稳定和精准，艾普拜植物核酸快速检测方案来帮忙。
艾普拜生物快速核酸检测流程（40分钟）
▎植物样本DNA快速提取（6min）
▎qPCR核酸检测(20-30分钟)
Pangaea快速荧光定量PCR系统： 96 样品通量、30 min完成
Pangaea Super 8 超快速荧光定量PCR系统：8 样品通量、20 min完成
▎结果判定（2分钟）
艾普拜植物快速检测解决方案，全流程仅需40分钟即可获得结果，相比常规检测更加快速、稳定、高效。现在联系我们还有早鸟特惠，心动不如行动，惊喜折扣等你揭晓！
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2023-06-13 10:33发布了技术文章
2023-04-25 09:55发布了问答
导读
除了在蛋白质翻译中的作用外，tRNA可以被切割成较短的生物活性片段，称为tRNA片段（tRFs）。来自精细胞的特定tRFs可以引起第二代小鼠中代谢紊乱。因此，种系细胞中的tRFs是表观遗传的一种机制，然而压力和毒素会导致tRFs模式的改变。华盛顿大学妇产科临床研究部的研究人员在MOLECULAR HUMAN REPRODUCTION上发表题为《Men who inject opioids exhibit altered tRNA-Gly-GCC isoforms in semen》的文章。本研究对注射类药物（一个重要的压力源）是否会影响生殖细胞中的tRFs感兴趣。研究者对来自注射阿pian类药物病人(PWID)和非药物使用对照组精液来源外泌体及精母细胞进行了RNA测序。测序后采用naica®微滴芯片数字PCR技术验证数据，该技术的应用为药物滥用相关生育问题的研究提供了新的策略和方法。
阿pian药物滥用对生殖系统的影响一直备受关注。近期一项研究揭示了注射阿pian类药物的男性精液中tRNA-Gly-GCC外泌体的变化。该研究通过数字PCR技术检测tRNA-Gly-GCC外泌体，发现未注射阿pian类药物的男性与注射阿pian类药物的男性精液中tRNA-Gly-GCC外泌体存在显著差异。
tRNA-Gly-GCC外泌体在精子发生和成熟过程中扮演关键角色。研究结果表明，这些差异可能与精子质量和生育能力的下降有关。naica®微滴芯片数字PCR技术在本研究中的应用，不仅提供了高灵敏度和高准确性的检测方法，对揭示阿pian类药物对生殖系统的影响具有重要意义。
应用亮点：
▶ naica®微滴芯片数字PCR技术可以在RNA浓度低于检测下限的样品中检测两种tRFs形式。
▶ naica®微滴芯片数字PCR结果与RNA测序结果具有很好的相关性，但比测序具有更高的灵敏度和准确性，有助于深入了解长期使用阿pian类药物的生物学影响。
研究结果：
▲图１.男性长期使用阿pian类药物导致精子中tRF-Gly亚型比例的变化,使用naica®微滴芯片数字PCR技术定量tRFs。成熟精子细胞通过45-90% Percoll梯度纯化，并使用核苷素试剂盒分离小RNA。cDNA使用一种特定的茎环RT引物与“长”tsRNA亚型（53个核苷酸长）或另一种靶向“短”tsRNA变体（32个核苷酸长）的特定RT引物生成。（A）每微升cDNA中“长”tRF Gly-GCC亚型的浓度。（B）每微升cDNA中“短”tRF Gly-GCC亚型的浓度。（C）“长”与“短”tRF Gly-GCC亚型的比例。（D）每微升cDNA中miR100-5p的浓度。“C”：对照组（不注射药品的男性）;“PWID”：阿pian药物注射组。P值通过单尾曼-惠特尼U检验计算。对照组：n=10，PWID组：n=13。
研究发现，对照组中超过90%的reads到较短的Gly-GCC tRF，而在PWID中只有45%的读数。相比之下，对照组中只有4.1%的reads到更长的tRF，而PWID为45.6%。PWID的长/短tRF比显著高于对照组。同时发现精液来源的外泌体中小核仁RNA（snoRNA）表达差异。尽管无法确立PWID的发现与阿pian类药物使用之间的直接联系，但研究表明阿pian类药物注射和/或相关多药使用习惯和生活方式改变可能会影响表观遗传。这为阿pian类药物使用的可遗传影响提供了证据，并为进一步研究其跨代健康影响的机制奠定了基础。
数字PCR技术在研究PWID中差异表达的tRFs方面发挥了重要作用。由于精液中含有复杂的细胞混合物，意味着其中含有抑制剂，对于PCR的扩增有很大影响。但数字PCR有抗抑制剂干扰的特点，所以对于这类复杂样本的检测更为适用。文章中数字PCR和测序各自发挥了作用：测序用于发现长tRF和短tRF，而数字PCR则准确检测了tRF片段的表达差异，进而验证了测序的结果。这一发现表明，数字PCR在研究tRFs和其他非编码RNA片段方面具有显著的优势。数字PCR不仅可以在tRFs和其他类似的研究中提供更为精确的结果，还可以在诸如癌症、遗传学和传染病等领域发挥关键作用。
naica®六通道数字PCR系统
法国Stilla Technologies公司naica®六通道数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的juedui拷贝数浓度。
2023-04-25 09:55发布了技术文章
2023-03-29 09:59发布了问答
1、前言
逆转录是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。在逆转录过程中必不可少的逆转录酶，除了其依赖RNA的DNA聚合酶活性，还需要镁离子或锰离子等辅助因子，同时包括依赖于DNA的DNA聚合酶活性和RNase H活性，它可以降解DNA与RNA杂交链中的RNA链。与典型的DNA聚合酶不同，逆转录酶缺乏校对功能，在PCR实验中逆转录酶存在抑制Taq聚合酶活性的功能，进而导致不准确的测定结果。
目前，常用的逆转录酶类型有两种，一是来自禽类成髓细胞瘤病毒（AMV）的逆转录酶，二是来自莫洛尼小鼠白血病病毒（M-MLV）的逆转录酶。AMV逆转录酶相对于其他类型的逆转录酶，它更具有加工性，具有更高的活性温度范围（42~48°C），更适合逆转录具有较强二级结构的RNA。然而，AMV逆转录酶具有相对较高的RNase H活性，这使其在合成长转录本方面的作用较小。相比之下，M-MLV 逆转录酶是由一个单一的亚基组成，具有较低的RNase H活性，由于这些特性，M-MLV RT经常被用于较长的转录本。M-MLV逆转录酶最适活性温度为37°C。许多M-MLV变体是可用的，包括RNase H点突变体，它们更耐热，更适合复杂困难的模板。
2、工作流程和用途
逆转录可用于生成适合各种下游应用的cDNA。
▲ 图1 RNA工作流程
在某些情况下，逆转录和实时荧光定量PCR在一个单一的反应混合液中反应时，称为一步法RT-qPCR。当逆转录和实时PCR在不同的反应混合液中发生时，被称为两步法RT-qPCR。
▲ 图2 两步法RT-qPCR工作流程
当需要大量cDNA通过PCR或qPCR研究多个转录本时，两步法是很好的选择。在一步法RT-qPCR中，目标序列在同一反应孔或容器中进行逆转录和qPCR扩增。用随机引物或oligo（dT）引物代替目标特异性引物。一步法RT-qPCR相对于两步法RT-qPCR需要的样本更少。此外，任何技术重复之间的方差都可以用来评估这两个酶促步骤的联合可变性。一步法RT- qPCR经常被用于RNA的定量和质量控制。一步法可能的劣势在于引物设计更复杂，因为引物必须在逆转录和PCR温度下同时发挥作用。
3、考量点
理想情况下，每一个靶向转录的RNA或mRNA分子都将转化为一个cDNA分子，即所有的靶RNA都将以相同的效率转录。然而，RT效率的可变性，无论是由于RNA样本质量、引物设计、RT酶的选择，还是其他因素，都会影响所产生的代表RNA分子在样本中的分布程度的cDNA。RT效率的变化是在RT-qPCR反应总体结果质量中一个被严重低估的因素，其影响已延伸到大量已发表的基因表达研究。MIQE指南中概述的如样本、核酸提取和逆转录细节，均是为了可以获得有效的RT-qPCR结果。成功的逆转录考量参数有以下几点：
RNA纯化和纯度：
在选择RNA提取方法时，需要考虑许多参数，但理想情况下，RNA样本应该不受污染蛋白质，如核酸酶，这可能会干扰cDNA合成和下游应用。产量是一个主要的考虑因素，然而，有效地去除基因组DNA（gDNA）同样重要。即使是少量的gDNA污染也会导致qPCR结果的可变性，而大量的gDNA污染也会导致直接的定量错误。减少对gDNA污染一种方法是在RNA分离方法中加入一个DNase酶消化的步骤。此外，应使用无逆转录酶对照（无RT）来确定RNA样本中是否存在gDNA。
RNA完整性：
RNA样本的完整性对于许多下游应用都是至关重要的。完整的真核生物的RNA一个重要特征是同时存在28S和18S核糖体RNA（rRNA）（图3）。这些条带的存在和整体RNA质量可以通过琼脂糖凝胶电泳和其他方法来评估。理想情况下，在琼脂糖凝胶上显示时，28S带的亮度应该是18S带的两倍，尽管大致相等的亮度也可以表明RNA在大多数应用中具有足够高的质量。
▲ 图3：RNA完整性电泳图，RNA降解导致拖带现象
逆转录引物：
cDNA合成通常涉及使用三种引物中的一种：Oligo（dT）引物、随机引物（Random primer）或基因特异性引物。随机引物是一种随机序列的短寡核苷酸，对于长（>4kb）或缺乏poly (A)尾巴的转录本，如原核mRNA的情况，它们可以在转录本的多个点上启动逆转录，因此，它们对于长mRNA和具有重要二级结构的转录本很有用。通常使用随机六聚体引物，使用随机八或九聚体引物可以促进更长的cDNA合成，因为它们杂交的频率较低。基因特异性引物通常用于一步（偶联）RT-PCR。这些方法通过将所有逆转录酶活性引导到特定的信息，而不是转录整个RNA来提高敏感性。对于目标扩增子长度约为100bp或以下的RT-qPCR应用，使用更高浓度的随机引物可能是有利的。设计跨越内含子或内含子-外显子边界的引物可以确保cDNA是由剪接的mRNA序列合成的，而不是gDNA中的亲本基因序列合成。经过生物素修饰或在5‘端添加序列标签等修饰的引物可用于纯化和/或分析由特定义或反义模板链合成的cDNA。
RNA的二级结构：
RNA分子具有影响逆转录的二级结构，而高GC含量会降低逆转录效率。在逆转录或cDNA合成前高温变性处理，可能有利于困难模板的逆转录。RNA可以通过在65°C下变性5分钟来打开其二级结构。
cDNA的qPCR定量：
强烈建议在cDNA合成后进行RT酶的热失活处理。RT酶失活后，要么直接通过qPCR对cDNA进行目标特异性的定量分析，要么将灭活的反应液冷冻保存，直到需要时才使用。qPCR反应混合物通常可容纳cDNA样本体积的增加，可占总反应体积的20%。cDNA可以作为未稀释的逆转录反应产物直接添加到qPCR中，也可以稀释后进行qPCR反应。cDNA的定量是RT-qPCR工作流程成功的关键。一般来说，作为模板的cDNA的量不应超过投入100ng总RNA逆转录后所得的量。由高度丰富的转录本产生的cDNA可以在不到1pg的总RNA中检测到。
4、总结
逆转录是RT-qPCR和其他广泛应用的关键步骤，我们必须仔细考虑RNA模板质量和实验设计细节，并清楚了解RT效率和RT偏差程度等性能特征。MIQE指南提供了一个实验设计细节框架，遵循相应准则可以获得有效且准确的RT-qPCR结果。
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