单细胞分选器的日常维护与管理

       单细胞分选器分选采用计算机自动控制毛细管技术从少量血液、骨 髓 、制备的各种组织细胞悬浮液任何单一类型细胞或稀有细胞（如循环肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞以及血液、 骨 髓中相关细胞等）的分离抓取，操作步骤是由软件控制。 

       单细胞分选器操作步骤：

      （1）设备预约：流式细胞分选仪应至少提前24小时预约使用，预约前应提前告知样品来源、抗体荧光染料信息和样品信息。 

      （2）环境质控：单细胞分选器应置放于密闭的洁净房间内，室温控制在18-22℃，湿度控制在20%-65%，同时配备紫外灭菌设备，实验前后使用紫外照射灭菌15min。 

      （3）鞘液管路清洗：单细胞分选器的鞘液管路系统采用 了全封闭系统，需要定期对鞘液管路进行灭菌维护。鞘液应使用无菌处理的PBS或生理盐水，鞘液需要定期更换;每月使用75%乙醇做为鞘液，进行管路灭菌，每次进行2小时，再使用无菌PBS或生理盐水冲洗管路2小时，清洗残留乙醇;半年更换一次滤芯，拆下滤芯后可使用5%次氯酸钠进行一次管路清洗，再使用75%乙醇沖洗，安装新的滤芯，用无菌PBS或生理盐水进行冲洗，滤芯不可接触次氯酸钠溶液。 

      （4）喷嘴清洗：喷嘴应每周或出现液滴状态不稳定时进行拆卸和清洗，清洗时取下喷嘴，嘴尖朝上放入盛有2mL无菌超纯水的流式管里，进行超声清洗15min，清洗2次;将5mL注射器拔出针头，吸入无菌超纯水，对准喷嘴尾部并压紧，推动注射器可看到喷嘴有稳定的液流喷出，再将注射器对准喷嘴尖部，缓慢推动，液体沿喷嘴内壁缓慢流出即说明喷嘴无堵塞，重复2次。 

      （5）进样针清洗：单细胞分选器提供了进样针外壁灭菌 系统，点击触屏上的“Clean”按钮，使用消毒液桶内预装的消毒鞘夜对进样针外壁灭菌;再点击“Rinse”按钮，使用鞘液对进样针润洗。 

      （6）上样管路清洗：开机调试前，应先上样75%乙醇对上样管路灭菌5min，再使用无菌超纯水上样5min。 

      （7）进行分选时，应使用无水乙醇对分选仓使用无水乙醇进行擦拭灭菌，保证分选仓的无菌状态，避免分选时样品污染。 

      （8）分选过程中发现有样品堵塞情况，应立即停止分选，点击触屏上的“Backflush”按钮对上样管路进行回冲2次，并上样无菌超纯水冲洗5min。 

      （9）每次完成实验后，需要更换鞘液并加至鞘液桶上限刻度线，如使用自配的PBS或其他鞘液需要进行高压灭菌;更换鞘液同时需要清倒废液桶的废液，并冲洗，防止下次实验因废液桶溢出而损坏空气泵。 

      （10）单细胞分选器的光路系统在厂家工程师的指导下可以根据实验需求进行光路调整和更改，严禁非管理人员擅自对电子系统、光路系统进行更改。 

      （11）样品要求：对于需要进行分选的样品，应当进行无菌处理，防止污染的样品对系统管理造成污染;上样前应使用300目（50μm）的无菌滤网过滤，防止对上样管路造成堵塞;拒绝接受有感染性病毒、微生物样品进行上样分选。  

      单细胞分选器拥有高速度、高纯度、高回收率和高准确性的特点，但是对运行环境要求较高，且设备零配件价格昂贵，到货周期长，所以正确、规范的调试方法和日常管理方法，可以保证单细胞分选器的稳定运行，准确有效地分选，节约设备的维护成本。