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利用血管紧张素I的提取比较传统SPE柱与磁性萃取剂的性能
发布:普敦实验室设备(上海)有限公司浏览次数:1707利用血管紧张素I的提取比较传统SPE柱与磁性萃取剂的性能
关键词
血管紧张素I,液相色谱质谱,固相萃取,Angiotensin I,Ang I,Renin,LC-MS/MS,SPE
前言
血管紧张素I(Ang I)是较为常见的临检标志物之一,通过对血管紧张素I提取效果的测试,能够有效地评价各种样品前处理手段的临床适用性和技术性能。
本文通过对比市售的某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取剂提取Ang I试验的各项方法学指标,直观地比较了两者的性能表现。也为临床SPE样品前处理技术的发展前景提供了非常有价值的参考。
实验设计
如下表所示,使用1% BSA制备四个浓度水平的Ang I系列标准溶液,辅以稳定同位素标记的Ang I内标。
Ang I
浓度(ng)
内标浓度(ng)
LOQ
0.5
10
低水平(L)
7.5
10
中水平(M)
30
10
高水平(H)
80
10
设定如下条件的SPE,应用于某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板。使用适配的正压96孔SPE操作装置运行样品。
名称
操作
活化
使用500 μL甲醇活化SPE板两次
平衡
使用500 μL5%甲酸水溶液活化SPE板两次
上样
取500 μL LOQ、低(L)、中(M)、高(H)上样
淋洗1
使用500 μL5%甲酸水溶液淋洗SPE板两次
淋洗2
使用500 μL20%甲醇水溶液淋洗SPE板两次
洗脱
每孔各加入250 μL甲醇,收集洗脱液于96孔板中
与此对应的,为AUTO M32全自动萃取仪设定如下的程序运行样品,每个样品使用2mg HLB磁性萃取剂。
指令
溶液
孔位
溶剂量(μL)
活化
甲醇
1
500
平衡
5%甲酸水溶液
2
500
上样
样品溶液
3
500
淋洗1
5%甲酸水溶液
4
500
淋洗2
20%甲醇水溶液
5
500
洗脱
甲醇
6
250
排废
/
2
600
数据和比较
将实验设计中所述的四个标准样本,每个样品重复三次提取,比较两种前处理方法提取后,在LC-MS/MS上测得的相对标准偏差,结果如下图所示。其中,左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后的测定结果,右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。
图b,低水平(L)重现性
可以看到,两种前处理方法无论在外表峰面积、内标峰面积、计算浓度上的相对标准偏差均没有显著的差别,但是磁性萃取剂的结果在大多数水平下都略好于传统的96位SPE多孔板。
在提取率的比较中,我们选择某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后测得的峰面积为基准(100%),以磁性萃取剂提取后测得的峰面积与之比较。如下图所示,左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后的测定结果,右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。
ZH如下图展示的LOQ水平两种方法提取后,在LC-MS/MS所得的MRM色谱图。图a为使用传统的96位SPE多孔板所得色谱图,图b为磁性萃取剂所得色谱图。可以看到,在所有浓度水平下,磁性萃取剂提取测得峰面积均显著地好于传统的96位SPE多孔板,且均超过后者50%以上,甚至达到了约1.8倍。
结果讨论明显地,在LOQ水平下,磁性萃取剂提取得到的色谱峰高超过了传统的96位SPE多孔板提取,这与提取率结果是完全一致的。
通过上述数据比较,我们可以得到如下表所述的结果。
JD重复性
相对重复性
提取率
LOQ质量
操作模式
某著名进口品牌96位SPE多孔板
较佳
较佳
适中
适中
手动+负压装置
磁性萃取剂
较佳
较佳
优50%以上
较佳
少量手动+自动设备
可以看到,在以上评价范围内,磁性萃取剂的提取效果均优于某著名进口品牌的HLB 96位SPE多孔板。同时,AUTO M32全自动提取仪固有的“一次移液”和“无人值守”操作模式,降低了样品前处理中的人为参与,同时大幅提高了自动化水平。
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