大鼠细胞白介素18试剂盒实验说明书

　　大鼠细胞白介素18试剂盒实验说明书

　　一、引言

　　本实验说明书旨在指导实验人员正确使用大鼠细胞白介素18(IL-18)试剂盒，进行大鼠细胞样本中白介素18的定量检测。本试剂盒基于夹心法酶联免疫吸附法(ELISA)原理，具有高灵敏度、高特异性和操作简便等特点，适用于科研实验和生物药物研究等领域。

　　二、试剂盒组成 本试剂盒包括以下组成部分：

　　1. 微孔酶标板：用于承载待测样本和标准品，进行免疫反应的场所。

　　2. 标准品：已知浓度的IL-18溶液，用于绘制标准曲线和校准实验结果。

　　3. 抗体溶液：包括捕获抗体和检测抗体，用于与待测样本中的IL-18特异性结合。

　　4. 酶标记物：用于标记检测抗体，以便在后续反应中识别并结合底物。

　　5. 底物溶液：在酶的作用下产生颜色反应，用于定量检测IL-18的含量。

　　6. 洗涤液：用于洗涤酶标板，去除未结合的抗体和杂质。

　　7. 终止液：用于终止颜色反应，使结果稳定可读。

　　三、实验原理

　　本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法(ELISA)进行IL-18的定量检测。首先将捕获抗体固定在微孔酶标板上，加入待测样本和标准品，样本中的IL-18与捕获抗体结合。随后加入酶标记的检测抗体，与已结合的IL-18形成“抗体-抗原-抗体”夹心复合物。洗涤去除未结合的抗体后，加入底物溶液，酶催化底物产生颜色反应。颜色的深浅与IL-18的浓度成正比，通过比色法可定量测定样本中IL-18的含量。

　　四、实验步骤

　　1. 准备试剂和器材：将试剂盒和所需器材(如移液器、恒温水浴箱等)置于室温下平衡20分钟。

　　2. 设置标准品孔和样本孔：在酶标板上设置不同浓度的标准品孔和待测样本孔，加入相应体积的标准品和样本。

　　3. 抗体孵育：向每孔加入适量的捕获抗体溶液，轻轻晃动酶标板使液体充分混合，然后在恒温水浴箱中孵育一定时间。

　　4. 洗涤：取出酶标板，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤数次，去除未结合的抗体和杂质。

　　5. 加入酶标记的检测抗体：向每孔加入酶标记的检测抗体溶液，再次孵育一定时间。

　　6. 再次洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗涤数次。

　　7. 加入底物溶液：向每孔加入底物溶液，避光孵育一段时间，使颜色反应充分进行。

　　8. 终止反应：加入终止液，终止颜色反应。

　　9. 结果读取：在规定时间内使用酶标仪读取各孔的光密度值(OD值)。

　　五、结果分析 根据标准品孔的OD值和浓度绘制标准曲线，通过标准曲线计算待测样本中IL-18的浓度。比较不同样本间IL-18浓度的差异，分析其在生物过程中的作用和意义。

　　六、注意事项

　　1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4、请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔一孔的 OD 值) ，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请乘以总稀释倍数(×n×5) 。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、底物请避光保存。

　　7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9、本试剂不同批号组分不得混用。

　　10、如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

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